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玉木耳RAPD分析 　　摘要：采用随机扩增多态性DNA (Randomly Amplified Polymorphic DNA, RAPD)技术分析玉木耳（white mutant strain of Auricularia fuscosuccinea）、九里湖木耳（A. fuscosuccinea）、黑木耳（A. auricula）8129和毛木耳（A. polytricha）781四个菌株之间的遗传差异性。结果表明，玉木耳与九里湖木耳之间的遗传相似系数大于0.99；4个菌株在遗传距离0.53的位置上可以分为三类：九里湖木耳和玉木耳为一类；黑木耳8129，毛木耳781各为一类。?? 　　关键词：玉木耳；?A白色变异菌株；?A随机扩增多态性DNA(RAPD)?? 　　文献标识码：S646.6; Q523??A 　　 　　琥珀褐木耳（Auricularia fuscosuccinea）属担子菌亚门（Enmycophyta），担子菌纲（Basidiomycetes），木耳目（Auriculariales），木耳科（Auriculariaceae），木耳属（Auricularia）[1]。玉木耳（white mutant strain of Auricularia fuscosuccinea）是福建省三明真菌研究所在驯化栽培野生琥珀褐木耳（1997年采自福建省仙游九里湖地区，故名九里湖木耳）过程中获得的一个纯白色自然变异菌株[2]。玉木耳子实体色泽洁白、质地脆嫩、味美可口、营养丰富，外观质地与海蜇相仿，可作为其替代品，很适合国内外鲜销或作为加工原料，深受市场欢迎。多年的栽培试验证实，该白色变异菌株的白色性状能稳定遗传，且栽培产量较高，是一个极具研究和开发价值的珍稀食用菌新品种。?? 　　为了从DNA水平上验证玉木耳与原始出发菌株――九里湖木耳的关系，确定玉木耳与九里湖木耳及木耳属其它种类之间的遗传差异，我们采用随机扩增多态性DNA (Randomly Amplified Polymorphic DNA, RAPD)技术对玉木耳等4个菌株进行了遗传差异性分析，现将试验结果报道如下。?? 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1?Σ牧? 　　1.1.1??供试菌株 　　玉木耳（white mutant strain of A. fuscosuccinea）、九里湖木耳（A. fuscosuccinea）、黑木耳（A. auricula）8129菌株和毛木耳（A. polytricha）781菌株均为福建省三明真菌研究所保藏菌种。?? 　　1.1.2?χ饕?仪器 　　冷冻离心机3K30为德国Sigma公司产品。?? 　　PCR扩增仪（AG22331 Hamburg）为德国Eppendorf公司产品。?? 　　凝胶成像系统TANON-2008为上海天能公司产品。?? 　　1.1.3?χ饕?试剂和引物 　　Taq酶、dNTPs、10×buffer缓冲液、Mg2+等均购自大连TaKaRa公司；RAPD引物为上海生工公司产品（表1）；其它试剂均为进口或国产分析纯。?? 　　1.3?Ψ椒? 　　1.3.1??DNA的提取 　　菌株于28 ℃常规液体摇瓶培养基（马铃薯200g， 　　葡萄糖20g，水1000 mL，pH自然）培养??12 d，用无菌纱布过滤收集菌丝体。称取1 g菌丝体置研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末，按文献[3]中的溴化十六烷三甲基铵（Cetyltrimethyl Ammonium Bromide, CTAB）法提取基因组DNA。?? 　　1.3.2??RAPD扩增条件 　　PCR扩增体系：浓度为30 ng/μL的模板DNA 1 μL， 10 × PCR buffer缓冲液2.5 μL，浓度为??25 mmol/L的 MgCl21 μL，浓度为??2.5 mmol/L的dNTP 2.5 μL，浓度为??10 μmol/L的 primer 1 μL，浓度为5 U/μL 的Taq DNA polymerase 0.25 μL，最后用ddH2O将总体积补至25 μL。?? 　　PCR扩增程序： 94 ℃预变性7 min； 94 ℃变性1 min，35 ℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，共35个循环；最后72 ℃补平10 min，终止温度为??4 ℃。PCR仪的升降温速率为每秒钟3 ℃。?? 　　1.3.3??PCR扩增产物检测 　　取10 μL DNA反应液，于1.4％琼脂糖凝胶（含GoldviewTM DNA染料）、160 V电压电泳1 h后，于紫外凝胶成像系统上拍照。?? 　　1.4?κ?据处理 　　用NTSYS-PC软件中的Simqual程序估算4个菌株的相似系数，