激光剥蚀电感耦合等离子体质谱法中生物样品元素分馏效应研究.docVIP

激光剥蚀电感耦合等离子体质谱法中生物样品元素分馏效应研究 　　摘 要 采用213 nm纳秒激光剥蚀系统对生物基体样品的剥蚀颗粒进行研究，优化了激光剥蚀条件。在剥蚀能量为25%，束斑直径为200 μm，剥蚀速率为20 μm/s，频率为20 Hz，载气为700 mL He + 700 mL Ar时，信?强度及稳定性最佳。以31P为内标元素，最佳剥蚀条件下，考察了56个元素的相对分馏因子。结果表明，生物基体的剥蚀颗粒相较于NIST 610 玻璃标样更大，达到3 μm；生物基体中元素分馏效应相较于玻璃基体小，大多数元素的相对分馏因子达到1.0 ±0.1。探讨了生物基体中元素分馏机理，分析了生物基体相较于玻璃基体剥蚀颗粒大，而相对分馏因子未明显增大的原因。一方面可能是粒径3 μm的颗粒进入电感耦合等离子体后能原子化；另一方面，大的剥蚀颗粒的富集效应相对较小。进一步对分馏效应的影响因素进行研究，发现分馏效应与激光剥蚀能量、激光频率和扫描速率相关，并且与元素的氧化物沸点负相关，与氧化物键能和电离能正相关。 　　关键词 激光剥蚀电感耦合等离子体质谱； 纳秒激光； 分馏效应； 生物样品 　　1 引 言 　　近年来，激光剥蚀电感耦合等离子体质谱法（LAICPMS） 作为一种重要的原位微区分析技术手段，具有空间分辨率高、检出限低等特点，已广泛应用于地球化学、冶金、生物医药等领域[1～4]。尤其是在生物医药领域，研究者采用LAICPMS研究抗癌药物在靶器官中的分布，并将其应用到蛋白组学、金属组学等领域[5，6]。然而LAICPMS仍面临着巨大的挑战――定量校准[4]。为克服这一难题，研究者建立了基体匹配[7]、内标校正[7]、在线溶液校准[8]等方法，但仍难于达到溶液样品进样ICPMS分析定量校准的线性和标准偏差要求，主要原因在于激光物质相互作用的复杂性，例如分馏效应[9]。 　　分馏效应是指不同元素在剥蚀蒸发及传输过程中行为的差异，测得的样品组分与样品组成有一定差异，即元素的非计量剥蚀。它的基体差异性发生在样品剥蚀、传输、蒸发、原子化和电离过程中。对分馏效应的研究多集中在硅酸盐样品或是金属基质样品[10，11]，研究了分馏效应与激光波长、激光脉冲宽度、激光能量、激光束斑及在ICP中的传输和离子化的影响[12，13]。但对于生物样品的分馏效应研究却较少。目前，LAICPMS方法在生物医药领域的广泛应用，使得对生物样品分馏效应的研究显得尤为重要。 　　本研究以动物组织为研究对象，研究了213 nm纳秒激光剥蚀系统对生物基体样品的剥蚀颗粒，考察了常见元素和微量元素的分馏效应，探讨了元素分馏机理，并对分馏效应的影响因素进行了研究。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器及参数 　　采用LSX213型号213 nm激光剥蚀系统（美国Cetac公司）与Thermo X Series Ⅱ电感耦合等离子体质谱仪 （美国 ThermoFisher Scientific公司） 联用的 LAICPMS 系统。ICPMS的主要工作参数选择见表 1。 　　2.2 试剂 　　2.3 实验样品 　　实验所用生物基体样品均为实验室自行配制的标准样品。取猪肾（购于本地超市）切成0.5 cm×0.5 cm薄片，在真空干燥箱中烘干， 待用。配制100和1000 μg/L标准溶液，用移液枪取6.8 μL滴至猪肾切片上，室温下自然风干。对自行配制的标准样品进行线扫描剥蚀，其标准曲线相关系数达到0.99～0.999， 信号RSD6.5%，认为配制的标准样品具备元素分布均匀性和数据准确性，可用于分馏效应研究。 　　实验玻璃基体样品为美国标准技术研究院（NIST）合成玻璃标准物质 NIST 610。 　　2.4 激光剥蚀颗粒的收集及表征 　　在最佳激光剥蚀条件下剥蚀生物基体样品和玻璃基体样品（NIST610），产生的剥蚀气溶胶通过载气输出，在输出口放置干净硅片并固定，收集30 min剥蚀颗粒后，将硅片密封，待测。利用场发射扫描电子显微镜（JSM6700F，日本电子株式会社）表征激光剥蚀颗粒形貌。 　　3 结果与讨论 　　3.1 激光参数优化 　　为获得最优信号强度及稳定性，以Cr为例，对激光剥蚀能量、束斑直径、扫描速率、频率和载气进行了优化，结果如图1所示。结果表明，当剥蚀能量为25%，束斑直径为200 μm，剥蚀速率为20 μm/s，频率为20 Hz，载气为He + Ar=700 mL+700 mL时，信号强度及RSD最佳。 　　3.2 分馏效应机理探讨 　　本研究所使用的是纳秒激光剥蚀系统， 相对于飞秒激光剥蚀系统分馏效应更强。这主要是由于纳秒激光的脉冲持续时间较长，通过雪崩电离获得激光能量的电子在脉冲结束前会将能量传递给晶格，因此在一定聚焦体积内，通过