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禽流感高效价卵黄抗体制备和应用 　　摘要:试验选用4个免疫增强成分,采用1%添加水平添加到130日龄法国伊莎褐壳蛋鸡的日粮中,并用禽流感H5N1疫苗连续免疫鸡群3次,试验结果显示,4个免疫增强成分的试验组与对照组相比,前两次免疫效果显著,但当血清抗体效价达到15log2左右时,效果不是很明显;用制备的高效价卵黄抗体与疫苗同时接种未免疫过的海兰褐蛋雏鸡发现其能填补单独使用疫苗免疫时的抗体空白期,可提高紧急预防高致病性禽流感的效果。 　　关键词:免疫增强剂;禽流感;抗体效价;抗体滴度;卵黄抗体 　　中图分类号:S852.5+2文献标识码:A文章编号:1007-273X(2010)06-0006-02 　　 　　在我国流行的高致病性禽流感毒株主要是H5N1亚型,对养禽业构成了严重的威胁,近几年我国养禽业由此遭受了重大的经济损失[1]。当禽流感暴发的时候,单独给疫区周边未免疫鸡群注射灭活苗后,会出现一定时间的抗体空白期,禽流感病毒可能就在此期间感染鸡群,从而带来巨大的经济损失。所以填补单独应用灭活苗时的鸡群的抗体空白期对于紧急预防接种、控制疫病传播具有重要的意义。本研究用中草药、蜂胶、蜂花粉作为免疫增强剂,研制高效价的卵黄抗体并用该卵黄抗体与疫苗一起接种非免疫鸡群,发现其有效的填补了抗体空白期,可提高紧急预防高致病性禽流感的效果。 　　 　　1材料 　　 　　 　　1.1试验动物 　　130日龄法国伊莎褐壳蛋鸡(已经进行过基础免疫)36只和1日龄的海兰褐蛋雏鸡72只。 　　1.2疫苗与抗原 　　禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株)由广东永顺生物制药有限公司生产。禽流感标准抗原由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司生产。 　　1.3试验药材 　　六味地黄散:熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、丹皮、茯苓;加味四君子汤:黄芪、党参、白术、当归、茯苓、甘草,均购于养天和大药房,蜂胶和油菜蜂花粉购于本地药材市场。 　　 　　2方法 　　 　　 　　2.1高效价卵黄抗体的制备 　　2.1.1疫苗的免疫接种及免疫增强成分的添加36只鸡随机分为6组(6只/组),在基础饲料的基础上,第1组添加1%的蜂胶,第2组添加1%的六味地黄散,第3组添加1%的加味四君子汤,第4组添加1%的油菜蜂花粉,第5组为对照组。第1~4组在一免前1周开始添加至试验结束。每组分别于购进鸡只后的第8、22、36天接种禽流感疫苗,一免1.0mL/只,二、三免1.5mL/只剂量肌肉注射重组禽流感灭活疫苗。 　　2.1.2免疫鸡群血清抗体的跟踪检测及高效价卵黄抗体的制备于一免后14d,二免后14d和三免后14d、28d、42d采血通过血凝抑制试验检测禽流感血清抗体效价,取血清效价在214以上的鸡重点采集鸡蛋用于高免卵黄抗体的制备,参照刘力威等[2]的卵黄抗体制备方法,制备和保存卵黄抗体,通过血凝抑制试验检测禽流感卵黄抗体效价。 　　2.2高效价卵黄抗体的应用 　　取制备好的高免卵黄抗体(抗体效价为215)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株)接种15日龄小鸡(6只/组)。试验分组情况见表1。 　　在免疫后1、3、6、8、11、15、20、30d采血,用HI方法测定血清中抗体效价。 　　 　　3结果 　　 　　3.1各组免疫增强成分对禽流感疫苗HI抗体效价的影响 　　由表2可见,在没有免疫前,鸡体血清平均效价都在6.5log2左右,在一免后14d检测抗体效价,试验组2、3与对照组比较差异极显著,试验组1、4与对照组比较差异显著;在二免后14d第4组抗体效价最高,达到了15.67个滴度,与对照组比较差异极显著,其他试验组与对照组比较差异显著;在三免后14d检测,试验组2、3与对照组比较差异显著,试验组1、4与对照组比较差异不显著;在三免后28d和42d各实验组与对照组比较差异都不显著。综合比较得出第3组(加味四君子汤组)效果最好。 　　3.2卵黄抗体的应用试验结果 　　取制备好的高免卵黄抗体(抗体效价为215)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-5株)接种15日龄小鸡(6只/组),试验结果见表3。 　　从表3中得出:①单独疫苗组不同剂量抗体效价在第1~6天差异不显著,而在第8~30天时差异显著;②单独的卵黄抗体组不同剂量之间抗体效价差异不显著,2个剂量组抗体效价都在第8天降到了免疫临界值以下;③卵黄抗体和灭活疫苗同时接种未免疫鸡,从整体水平上看,第8组抗体效价最好,平均滴度是6.22。第8组在第11天抗体滴度下降到3.33后在第15天又上升到8.33,但在第20天和第30天上升幅度很小,基本持平;④第5、6组和第1组比较,第7、8组和第2组比较,从第11天开始单独的疫苗组抗体效价都比卵黄