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痰培养病原菌分布及耐药率分析 　　摘要：目的 探讨分析中国辐射防护研究院医院2011年1月～2013年12月门诊及住院患者呼吸系统感染阳性报告的主要病原菌菌群分布及耐药性分析，为临床医生提供敏感抗生素针对性治疗，减少耐药菌株的出现。方法 用梅里埃API进行细菌鉴定，药敏试验结果按临床和实验室标准化研究所（CLSI）标准进行Kirby-Bauer（K-B）法折点报告。结果 在进行痰培养的616份标本中，共分离出病原菌391株，阳性检出率占63.47%。引起本院呼吸系统感染的细菌主要为革兰氏阴性杆菌252株占64.45%，其次为革兰氏阳性球菌115株占29.41%，以及假丝酵母菌24株占6.14%。药敏结果显示革兰氏阳性球菌对万古霉素的耐药率为0，对青霉素的耐药率较高，特别是金黄色葡萄球菌，高达100.0%；革兰氏阴性杆菌对一、二、三代头孢类抗生素耐药率较高，均达50%以上；对亚胺培南、阿米卡星及含有酶抑制剂的β-内酰胺类抗生素耐药率较低。结论 呼吸系统感染的细菌耐药率较高，临床上应提高痰培养的送检率，根据药敏结果合理使用抗生素。 　　关键词：呼吸系统感染；菌群分布；耐药率；药敏结果 　　近年来由于抗生素的广泛使用，细菌的耐药率越来越严重，对于呼吸系统感染患者应及时送检痰培养及药敏试验，根据药敏结果正确使用抗生素，避免耐药菌株甚至多重耐药菌的产生。因此呼吸系统感染标本的病原学检验对抗生素的合理使用非常重要，现对本院2011年1月～2013年12月，门诊和住院呼吸系统感染患者痰标本中分离出的391株病原菌进行分析，探讨呼吸系统感染的菌群分布及主要病原菌的耐药率，以指导临床合理用药。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 2011年1月～2013年12月份中国辐射防护研究院医院门诊及住院呼吸系统感染患者616例的痰液标本，患者有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性。经显微镜低倍镜检白细胞≥25，鳞状上皮细胞10/视野。 　　1.2 方法 采用自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前用冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌容器中，标本量要≥1ml，标本要尽快送检，室温保存≤2h，且要在使用抗生素之前采集标本。 　　1.3仪器及试剂 力康生物安全柜；郑州安图生物工程有限公司的血琼脂平板，中国兰平板、巧克力平板及Mueller-Hinton（MH）琼脂平板；生物梅里埃API试剂盒及其配套的试剂；药敏纸片：亚胺培南10ug、氨苄西林10 ug、头孢唑林30 ug、头孢呋新30 ug、头孢他啶30 ug、头孢吡肟30 ug、左氧氟沙星30 ug、阿米卡星30 ug、头孢哌酮/舒巴坦ug、环丙沙星5 ug、头孢西丁、ug红霉素15 ug、万古霉素30 ug、青霉素10 ug、利福平5 ug、复方新诺明250/300 ug。 　　1.4细菌分离和鉴定 严格按照《全国临床检验操作规程》[1]进行操作，将痰标本分别划区接种于血琼脂平板，中国兰平板、巧克力平板。巧克力平板需置5%二氧化碳培养箱，35℃培养24h。选取单个病原菌用生理盐水将菌液调成0.5麦氏单位后接种于API测试条，35℃培养24h后加入附加试剂，根据所得编码得出鉴定结果。 　　1.5药敏试验 药敏试验采用郑州安图生物工程有限公司的90mm规格的Mueller-Hinton（MH）琼脂平板采用纸片扩散法（K-B），用生理盐水将菌液调成0.5麦氏单位后，用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液，用棉拭子涂布整个M-H琼脂表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈。放置3～10min后，贴药敏纸片，每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平板边缘不少于15mm，15min内贴完纸片。同时每周或药敏纸片更换时用质控菌株做K-B法质控，质控菌株分别为大肠埃希菌ATCC 25922，金黄色葡萄球菌ATCC 25923 和铜绿假单胞菌ATCC 27853，结果按临床和实验室标准化研究所（CLSI）标准进行判读。 　　2结果 　　2.1病原菌分布 2011年1月～2013年12月呼吸系统感染者痰标本培养分离出的391株病原菌分布情况见表1。 　　2.2常见病原菌分布 2011年1月～2013年12月呼吸系统感染患者痰标本培养分离出的391株病原菌中常见病原菌分布比例见表2。 　　2.3分离的常见病原菌的耐药率 通过表2可知引起呼吸系统感染的常见革兰氏阳性菌主要为金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌。革兰氏阳性菌对万古霉素的耐药率为0，对青霉素的耐药率较高，特别是金黄色葡萄球菌，高达100.0%；革兰氏阴性杆菌主要为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌及阴沟肠杆菌。革兰阴性杆菌对一、二、三代头孢类抗生素耐药率较高，均达50%以上；对亚