红花黄色素联合依达拉奉对心肌缺血再灌注损伤保护作用及机制.docVIP

红花黄色素联合依达拉奉对心肌缺血再灌注损伤保护作用及机制 　　摘要：目的 研究红花黄色素（safflor yellow， SY）联合依达拉奉（Edaravone， Eda）对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用及机制。方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型，30只雄性SD大鼠按照随机数字表随机分为5组（每组6只）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、SY90mg/kg组（SY组）、Eda10mg/kg组（Eda组），SY90mg/kg联合Eda10mg/kg组（SY+Eda组）。比色法测血浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），我院生化室测肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平，TUNEL染色分析细胞凋亡。结果 与I/R组相比，SY组、Eda组血浆SOD活性升高，MDA、CK-MB含量及心肌细胞凋亡率降低，差异有统计学意义（P0.05）；SY+Eda组与SY组、Eda组相比较，血浆SOD活性升高，MDA、CK-MB含量及心肌细胞凋亡减降低，差异有统计学意义（P0.05）。结论 在缺血性心肌损伤中，氧自由基过量生成，心肌细胞大量凋亡，SY、Eda可清除过量生成的氧自由基，降低心肌细胞的凋亡，提示其保护作用与其清除过量生成氧自由基有关，SY及Eda联合用药可加强对MIRI的保护作用。 　　关键词：红花黄色素；依达拉奉；氧自由基；心肌缺血再灌注 　　心肌缺血性疾病严重危害人类的生命健康，通过介入或药物溶栓等方法使冠脉再通，是保护缺血心肌的关键，但是由此也可导致心肌缺血再灌注损伤（MIRI），这严重影响了其在临床上的应用效果。寻找高效、低毒的治疗MIRI的药物，制定合理的治疗方案，成为迫切需要解决的问题。本研究旨在探讨红花黄色素（safflor yellow， SY）联合依达拉奉（Edaravone， Eda）对MIRI的保护作用及机制，为临床合理用药提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1主要试剂和仪器 SY（山西华辉凯德制药有限公司提供）；Eda（南京先声制药有限公司提供）；SOD、MDA及TUNEL试剂盒均购自于南京建成生物科技有限公司；BL-420s生物机能系统、小动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；Bio-Tek酶标仪（美国）；LEICA DMIL倒置显微镜（德国）。 　　1.2动物与分组 健康成年雄性SD大鼠（由徐州医学院实验动物中心提供）30只，体重250300g，随机分为5组（每组6只）：假手术组（Sham组）、心肌缺血再灌注组（I/R组）、SY90mg/kg组（SY组）、Eda10mg/kg组（Eda组），SY90mg/kg联合Eda10mg/kg组（SY+Eda组）。所有试验均经徐州医学院实验动物福利和应用委员会批准，并遵守国际卫生协会《实验动物福利和应用指南》。 　　1.3心脏I/R模型的制备和实验方案 大鼠10%水合氯醛（3.5ml/100g）腹腔注射麻醉后仰卧固定，针式电极固定于大鼠四肢皮下监测肢体Ⅱ导联心电图变化，腹腔注射肝素钠（500U/kg）抗凝。行气管切开，气管插管，小动物呼吸机辅助呼吸（呼吸频率75次/min，潮气量68ml，呼吸比1：2）。暴露心脏，左心耳根部下方2mm处与肺动脉圆锥间穿线，采用套管法，通过牵拉结扎线结扎冠脉，以心电图Ⅱ导联ST段明显抬高，心肌颜色变暗为结扎成功的标志，松开动脉夹进行再灌注[1]。Sham组只穿缝线，不结扎。模型组及药物干预各组均进行30min缺血和120min再灌注。再灌注前1min，I/R组、SY组、Eda组、SY+Eda组分别经右侧股静脉输注生理盐水、SY90mg/kg、Eda10mg/kg、SY90mg/kg和Eda10mg/kg，SY及Eda均用等量生理盐水稀释。Sham组在对应时间点股静脉输注等量生理盐水。 　　1.4观察指标 　　1.4.1测血浆SOD、MDA、CK-MB含量 每组取6只大鼠，缺血再灌注末经右心室直接穿刺采血，2500r/min离心10min，提取血浆放入-80℃冰箱中，待标本收集完毕后，按试剂盒说明采用比色法测定SOD、MDA，于我院生化检验室自动生化仪测定血浆CK-MB活性。 　　1.4.2组织病理学观察 每组取6只大鼠，缺血再灌注末迅速剪取左心室前壁缺血区心肌组织浸入10%的甲醛溶液中固定2448h，自动脱水机脱水，石蜡包埋、切片。按TUNEL试剂盒说明进行染色，凋亡的细胞核被染成棕褐色，未凋亡的细胞核为深蓝色。高倍镜（×400倍）下每张切片随机选取10个互不重叠视野计算凋亡率：凋亡率/%=（视野内凋亡细胞个数/视野内所有细胞个数）×100%。 　　1.4.3统计学处理 应用SSPS13.0统计软件，实验数据以均数±标准差（x±s）表示。统计分析采用单因素方差分析（One-Way ANO