茑萝变异植株组织培养及无性系建立研究.docVIP

茑萝变异植株组织培养及无性系建立研究 　　摘要 试验研究了具有有利变异嫩茎茑萝愈伤组织的诱导、分化、试管苗生根、移栽、扦插及田间栽培所需要的条件，并建立起茑萝有利变异植株的无性系。结果证明：MS+BA 0.4mg/L+ NAA 0.8mg/L是诱导愈伤组织的理想培养基；MS+La（NO3）2 2.0mg/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L是诱导愈伤组织分化和不定芽分化的理想培养基；1/3 MS+IAA 0.3mg/L为不定芽生根培养的理想培养基；以炉灰渣为试管苗的移栽扦插基质，移栽成活率为96%，扦插成活率为92%；移栽、扦插的试管苗保持了有利变异性状。 　　关键词 茑萝；愈伤组织；无性系；快速繁殖 　　 　　茑萝（Quamoclit pennata Bojer Hort）又称羽叶茑萝、游龙草、茑萝松、锦屏封，属于旋花科牵牛属一年生草本植物。原产墨西哥等地，我国广泛栽培[1，2]。茑萝姿态优美，花姿玲珑，可用作篱垣、棚架绿化材料，还可作地被植物，不设支架，随其爬覆地面，也可进行盆栽观赏，搭架攀援，易造成各种形状。在观赏栽培中，偶尔可以出现具有有利性状的变异植株，用种子对变异植株进行繁殖时，无法保持其后代的优良变异性状，从而影响了茑萝变异植株在生产上的应用。为了满足观赏与生产的需要，2002年6月，当我们再次发现了生长非常旺盛、单花开花时间延长7d左右的有利变异茑萝植株时，立即进行了组织培养及无性系建立的研究，以期通过组织培养的方法建立起变异植株的无性系，达到使优良性状得到保存、满足人们栽培观赏的需要。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　田间具有有利变异性状的茑萝嫩茎。 　　1.2方法 　　将嫩茎剪段放到500mL的广口瓶中，流水冲洗20min后，用0.05%安利洗涤液振荡洗涤10min，移至超净工作台上，用无菌水洗涤2次，倒入70%乙醇灭菌约10s，迅速用无菌水洗涤1次，再用0.05% HgCl3溶液振荡灭菌9min，接着用无菌水洗涤5次，再将无菌嫩茎切成约0.2~0.5cm的茎段，接种到相应的固体培养基上，进行观察培养。 　　培养基以MS和1/2MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素和生长素。以MS为基本培养基时，加蔗糖30g/L；以1/2MS为基本培养基时，加蔗糖15g/L。培养基胨力强度为180g/cm2 [3]，pH值5.8~6.0，培养温度18~26℃，光照12h/d，光照度2 000~4 000Lx。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1愈伤组织的诱导 　　将无菌嫩茎接种到以MS和1/2MS为基本培养基，附加不同浓度的BA、2，4-D和NAA的培养基上，进行愈伤组织的诱导。15d时在有的培养基上可见开始形成愈伤组织，60d观察统计。由表1可见，在不加激素、只加不同浓度BA的培养基上不能诱导形成愈伤组织，而在培养基中加入不同浓度的BA和不同浓度的2，4-D或NAA时，接种的嫩茎都能够诱导形成愈伤组织。但所诱导的愈伤组织生长速度及外部形态却差异较大。其中BA为0.4mg/L、NAA为0.8 mg/L这一培养基上，不仅愈伤组织的诱导率达100%，愈伤组织的生长速度快，外观呈绿色的颗粒状，而且质地较为疏松。一般认为，这种愈伤组织为具有分化能力的愈伤组织[4，5]。将在上述培养基上诱导的愈伤组织，在相同的培养基上连续继代培养10代，形成的愈伤组织仍为具有分化能力的愈伤组织。这说明，MS+BA 0.4mg/L+ NAA 0.8mg/L是诱导茑萝嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基。 　　2.2愈伤组织的分化 　　将继代培养的愈伤组织接种到以 MS+ La（NO3）2 2.0 mg/L为基本培养基，附加不同浓度的BA、IBA和NAA的培养基上进行分化培养，25 d时可见开始分化。60d时观察统计。由表2可见，在不含任何激素、BA单独使用和BA与IBA配合使用的培养基上愈伤组织不能分化。在细胞分裂素BA与生长素NAA配合使用的培养基上，愈伤组织可以分化出不定芽。但从愈伤组织的分化率及分化不定芽的长势看，在MS+ La（NO3）2 2.0mg/L+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L的培养基上，不仅颗粒状愈伤组织分化率达到了98%，平均每块愈伤组织的分化不定芽数达3.6个，而且分化苗长势好。观察还表明，在该培养基上诱导的分化苗，呈嫩绿色丛生状，株高多在0.5cm以上；对已经分化的不定芽进行继代培养，连续培养9代，不定芽以30d 分化出3.9个的速度进行分化。这说明MS+ La（NO3）2 2.0mg/L +BA 1.0 mg/L +NAA 0.1mg/L是诱导茑萝愈伤组织分化和不定芽分化的理想培养基。 　　2.3不定苗的生根培养和生根继代快速