半枝莲抗癌成分的分析-细胞生物学专业论文.docxVIP

山东师范大学硕士学位论文 i i 目 录 英文缩略词表 I 摘 要 I ABSTRACT II 第一章 综 述 1 1 中药半枝莲的化学成分研究概述 1 2 半枝莲抗肿瘤作用及机制 3 3 斑马鱼在抑制肿瘤血管生成药物筛选中的应用 6 第二章 半枝莲提取物抑制血管生成活性的研究 9 1 半枝莲 75%乙醇提取物不同极性部位的制备 9 2 半枝莲不同极性部位的抑制血管生成活性筛选 10 3 本章小结 13 第三章 半枝莲乙酸乙酯提取物化学成分的研究 14 1 半枝莲乙酸乙酯提取物化学成分的分离 14 2 分离得到的化合物的结构研究 16 3 本章小结 30 第四章 半枝莲中 13 种单体化合物抑制血管生成的活性测定 32 1 材料与仪器 32 2 实验方法与步骤 33 3 结果与讨论 35 4 本章小结 39 讨 论 40 结 论 44 参考文献 45 攻读学位期间发表的学术论文 51 致 谢 52 山东师范大学硕士学位论文 I I 英文缩略词表 英文缩写 英 文 中 文 CAM chorioallantoic membrane 鸡胚绒毛尿囊膜 BAEC bovine aortic endothelial cells 牛大动脉内皮细胞 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 bFGF basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因 子 HUVEC human umbilical vein endothelial cell 人脐静脉内皮细胞 MTT methy thiazolyl tetrazolium 四甲基偶氮唑盐 MVD microvessel density 微血管密度 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 siRNA Flk-1 small interfering RNA fetal liver kinase 1 小干扰 RNA 血管内皮生长因子受体 VEGFR-2 vascular endothelial growth factor receptor-2 血管内皮细胞生长因子 GFP green fluorescent protein 受体-2 绿色萤光蛋白 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 I I 摘 要 半枝莲(Herba Scutellariae Barbatae)为唇形科(Labiatae)黄芩属植物半枝莲 Scutellaria barbara D．Don 的干燥全草。分布于华东、华南、西南及河北、河南、陕西南部、湖北、 湖南等地。半枝莲味辛、苦、性寒。归肺、肝、肾经。是中医处方和成药中的常用中药。 具有清热解毒、化瘀利尿的功效，用于疔疮肿毒、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑肿痛及水肿、 黄疸等。 癌症又称恶性肿瘤，是目前危害人类健康的主要疾病之一，近年来，从中药提取的抗 肿瘤有效成分日益得到人们的重视。半枝莲是近几年国内外抗肿瘤药的研究热点之一。现 代药理研究表明，半枝莲水提物和醇提物抗肿瘤的作用机制主要包括：直接抑制肿瘤生长 与增殖作用、诱导肿瘤细胞凋亡作用、抗氧化抗自由基作用等。但已有文献中有关半枝莲 及其化学成分的抑制血管生成作用方面的研究很少，有少量体外活性试验的报道，尚无人 用活体动物开展半枝莲及其提取物抑制血管生成活性方面的研究。本文利用斑马鱼抑制血 管生成模型对半枝莲化学成分进行了逐级筛选，迄今为止未见报道。 本文对半枝莲75%乙醇提取物进行了系统研究，首先采用溶剂萃取法对其行了初步分 离，得到不同极性的三部分，分别是石油醚层提取物、乙酸乙酯层提取物、正丁醇层提取 物。利用斑马鱼抑制血管生成模型对三种提取物进行了活性测定，确定了乙酸乙酯层提取 物有抑制血管生成活性。然后采用硅胶柱色谱，凝胶柱色谱，重结晶等手段，对乙酸乙酯 层提取物进行了进一步的分离，得到了13种化合物，并通过理化性质和光谱数据分析确定 其化学结构，这些化合物分别为：β-谷甾醇、汉黄芩素、4?-羟基汉黄芩素、芹菜素、黄芩 素、柚皮素、木犀草素、异鼠李素、槲皮素、β-胡萝卜苷、野黄芩苷、黄芩苷、木犀草苷。 最后利用斑马鱼模型对这13种化合物的抑制血管生成活性分别进行了测定，确定异鼠李素 和槲皮素具有抑制血管生成活性,并且随着样品浓度增大抑制血管生成活性随之增强。在 100μg/mL时，抑制率分别达到76.79%和61.24%。 关键词：半枝莲；化学成分；抗肿瘤；斑马鱼；抑制血管生成 Researches on constituents of Herba scutellaria barbata in