斑马鱼甘露糖结合凝集素基因的表达和免疫功能的研究-发育生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 ， 也 不 包 含 未 获 得 （注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入 CNKI《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 中国海 中国海洋大学硕士论文 斑马鱼甘露糖结合凝集素基因的表达和免疫功能的研究 摘要 凝集素途径是通过甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin，MBL）识别 病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns)，然后激活甘露糖结合 凝集素相关丝氨酸蛋白酶（MBL-associated serine proteases, MASPs），从而激活 补体系统。 在本研究中，我们检测了在斑马鱼的早期胚胎中存在甘露糖结合凝集素基因 的 mRNA 和甘露糖结合凝集素蛋白。同时，重组的斑马鱼甘露糖结合凝集素能 够和革兰氏阴性菌大肠杆菌、革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌结合；rMBL 能够促 进鲤鱼巨噬细胞对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的吞噬作用，以上实验结果说明， 和哺乳动物的 MBL 一样，斑马鱼的 MBL 同时具有模式识别和调理素双重功能。 更为重要的是，我们向斑马鱼的早期胚胎中显微注射 MBL 的抗体，从而导致被 嗜水气单胞菌感染的胚胎死亡率显著增高；而向感染细菌的胚胎中注射 rMBL（导 致胚胎内 MBL 的增多）能够显著提高胚胎的存活率，同时注射 actin 抗体和 rMBL，和只注射 rMBL 的效果基本一致，但是当同时注射 MBL 抗体和 rMBL 时，这种效果明显被抑制了。这说明在斑马鱼免疫系统还未完全成熟之前，凝集 素途径可能已经在斑马鱼早期胚胎中发挥功能，保护早期胚胎免受病原菌的侵 染。这个工作为了解动物早期胚胎凝集素途径扮演的免疫角色提供了新的视角。 关键词：斑马鱼；补体；甘露糖结合凝集素；菌结合能力。 I II Expression and Functional characterization of mannose-binding lectin in zebrafish Abstract The lectin pathway involves recognition of pathogen-associated molecular patterns by mannose-binding lectin (MBL), and the subsequent activation of associated enzymes, termed MBL-associated serine proteases (MASPs). In this study, we demonstrate that the transcript of MBL gene is present in the early embryo of zebrafish, and MBL protein is present in zebrafish embryo. We also show that recombinant zebrafish MBL was able to bind the Gram-negative bacterium Escherichia coli and the Gram-positive bacterium Staphylococcus aureus, and rMBL was able to promote the phagocytosis of E. coli and S. aureus by macrophages, indicating that like mammali