北苍术多糖的提取、性质及抗肿瘤活性研究-药学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密 √ 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 目的： 中文摘要 本文对北苍术多糖的提取、分离纯化工艺进行了优选，并对其单糖组成、 抗肿瘤活性进行了初步探测。研究了纯化后的北苍术多糖的部分物理化学性质， 分子量，糖醛酸含量、单糖组成及其连接方式，为北苍术多糖的规模化生产及 临床应用提供了实验依据。 方法： 1.以北苍术多糖的含量和纯度为指标考察了半纤维素酶、纤维素酶、果胶 酶及其复合酶法辅助超声提取对北苍术多糖提取率的影响，优选出最佳的酶组 合。利用正交试验考察酶解温度、酶解时间、酶解 pH 及料液比对北苍术多糖含 量的影响，优选出最佳酶解工艺。 .以北苍术多糖损失率，脱蛋白率为指标，考察 Sevag 法、三氯乙酸法、 木瓜蛋白酶酶解-三氯乙酸法及三氯乙酸-正丁醇法对北苍术多糖脱蛋白的影响。 通过 DEAE-Sepharose Fast Flow 柱层析和 Sephadex-150 凝胶柱层析进行分离纯 化，得到北苍术精制多糖。 3.通过间羟基连苯法测定糖醛酸的含量，并通过红外光谱（IR），凝胶渗透 色谱，气质联用（GC-MS）对所得北苍术精制多糖进行了性质、分子量和组成 分析的研究。并采用 MTT 法测定北苍术多糖对卵巢癌细胞株 Skov3 细胞增殖的 抑制作用，台盼蓝法测定北苍术多糖对 Hela 细胞、肝癌细胞株 hepg2 及 7721 的影响。 结果： 1.酶法辅助超声提取北苍术多糖的最佳酶解组合为纤维素酶与果胶酶（比 例为 1:1），最佳酶解工艺为酶用量为药材的 1.2%（g/g），在 pH5、50℃条件下 酶解 50min，在此条件下，北苍术多糖的提取率是 32.29％，远高于不酶解的对 照组（高出 48.66%）。DEAE-Sepharose Fast Flow 柱层析法及 SephadexG-150 凝 胶柱层析法分离均得到一个单一组分，经苯酚-浓硫酸法测定其纯度达 92.68%。 2.实验所得北苍术精制多糖为均一组分，白色粉末，易溶于水，其多糖含 量为 92.68%，蛋白质含量为 0.8%，粗多糖和精制多糖糖醛酸含量分别为 4.36 % 和 4.07 %，分子量为 11171Da。红外光谱显示出多糖的特征峰。GC-MS 测定其 仅有果糖组成，并以 2→1 方式连接。 I .北苍术多糖对卵巢癌细胞株 skov3、人宫颈癌 Hela 细胞、肝癌细胞株 hepg2 及 7721 增殖均有明显的抑制作用，尤其是对肝癌细胞株 hepg2 增殖的抑制率达 87.40%。 结论： 在本实验研究中，采用不同的酶对北苍术药材进行酶解后以超声提取北苍 术多糖，以多糖的含量和纯度为指标，进行酶解北苍术工艺的初探。经过筛选， 选定纤维素酶与果胶酶（比例为 1:1）为北苍术的酶解方法。并以该方法辅助超 声提取北苍术多糖，考察了酶解温度，酶解时间、酶解 pH 及料液比对北苍术多 糖含量的影响。在此条件下，北苍术多糖的提取率为 32.29%，远高于不酶解的 对照组（比直接超声法高出 48.66%），条件稳定且重现性好。本实验选取的脱 蛋白方法为 TCA 法，在此方法下脱蛋白后的北苍术多糖含量高，损失少。脱蛋 白后的北苍术多糖经 DEAE 阴离子交换柱和 Sephadex-G150 凝胶柱纯化后为单 一峰，多糖纯度高达 92.68%，GC-MS 法测定其由果糖(98.2 %)和少量的葡萄糖 (1.8 %)组成，并以 2→1 方式连接。综合甲基化及 NMR 图谱分析结果，ACPS 的结构可以表示如下： α-D-Glcp-(1→2)-[β-D-Fruf-(1→2)-β-D-Fruf-]n-(1→2)-β-D-Fruf，其对对人卵巢 癌细胞株 Skov3、肝癌细胞株 hepg2 及 7721、宫颈癌 Hela 细胞的增殖均有一定 的抑制作用。本研究为扩