苗药金乌健骨方对CIA大鼠血清IL1IL33影响.docVIP

苗药金乌健骨方对CIA大鼠血清IL1IL33影响 　　【摘 要】目的：探讨金乌健骨方对胶原诱导性关节炎模型大鼠白细胞介素-1、白细胞介素-33的影响。方法：将40只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、金乌健骨方治疗组及雷公藤多苷对照组，每组10只，建立胶原诱导性关节炎模型大鼠，观察金乌健骨方及雷公藤多苷治疗4周后，胶原诱导性关节炎大鼠血清白细胞介素-1、白细胞介素-33含量变化。结果：模型组大鼠白细胞介素-1、白细胞介素-33的活性高于空白对照组（P 0.05），与模型组比较，金乌健骨方组与雷公藤多苷组白细胞介素-1、白细胞介素-33的活性明显下降，差异有统计学意义（P 0.05）。结论：金乌健骨方可抑制胶原诱导性关节炎大鼠白细胞介素-1、白细胞介素-33的活性。 　　【关键词】 关节炎，胶原诱导性；白细胞介素-1；白细胞介素-33；金乌健骨方；大鼠 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以众多细胞因子参与的侵蚀性滑膜炎为特点的自身免疫性疾病，以对称性多关节、小关节疼痛肿胀为主要表现，后期导致关节畸形及功能活动受限。其确切病因尚未明确，大多数学者认为与感染、遗传、免疫等因素有关。其发病机制复杂，目前研究主要集中在参与疾病的免疫细胞及炎症反应过程。课题组在前期临床观察[1-2]及实验研究中发现[3]，金乌健骨方能控制患者的病情，提高临床疗效，改善生活质量，抑制大鼠多种炎症因子的表达。本实验通过苗药金乌健骨方对RA模型大鼠血清白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-33（IL-33）的影响，探讨金乌健骨方对RA炎症介质的干预作用。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 清洁级雌性Wistar大鼠[由重庆滕鑫生物技术有限公司提供，合格证号：SCXK（渝40只，6周龄，体质量（150±20）g。所有大鼠在相同条件下喂养，自由饮食、饮水，温度控制在18～22 ℃。 　　1.2 主要试剂 牛II型胶原，购于美国Sigma公司；弗氏完全佐剂，购于美国Sigma公司；醋酸，购于上海国药，商品编号大鼠IL-1 ELISA试剂盒（M3300）、大鼠IL-33 ELISA试剂盒（RRA00），购于美国RD公司。 　　1.3 主要仪器 电子天平：型号AWH（SA）-1.5kg。台式冷冻离心机：德国SIGMA，货号A1330005。Bio-Tek 宝特 ELx800酶标仪；大鼠足趾容积测量仪：上海软隆科技发展有限公司，规格：YLS-7B。均由本院实验室提供。 　　2 方 法 　　2.1 试剂配制 用无菌蒸馏水配制为0.1 mol·L-1的醋酸溶液，将牛II型胶原溶于0.1 mol·L-1醋酸溶液中，使浓度为2 mg·mL-1，放置于4 ℃冰箱过夜备用，次日与等体积弗氏完全佐剂在冰浴中充分乳化，配制成胶原乳剂浓度为1 mg·mL-1，于4 ℃冰箱保存备用。 　　2.2 造模与分组 随机选取10只Wistar大鼠作为空白对照组，其余各组大鼠参照文献[4]建立胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）模型。于大鼠脊背部、尾根部皮下多点注射胶原乳剂0.4 mL，第14 天再予0.4 mL胶原乳剂加强免疫1次。将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、金乌健骨汤组和雷公藤对照组，每组10只。 　　2.3 给 药 造模第21 天后，各组灌胃给药。金乌健骨方由金毛狗脊15 g、乌梢蛇10 g、千年健15 g、黑骨藤10 g、青风藤20 g、姜黄20 g、白芍15 g、三七粉3 g等8味中药组成（生药购自贵阳中医学院第二附属医院）。将金乌健骨方汤液浓缩至0.72 g·mL-1， 　　每只大鼠给予金乌健骨方浓缩液3 mL；雷公藤多苷（湖南协力药业有限公司生产，国药准字给药剂量为6 mg·kg-1·d-1。空白对照组与模型对照组分别予等体积的生理盐水灌胃，总疗程为4周（有少许大鼠于致炎后出现相互残杀及不明原因死亡，未做具体死亡原因分析）。 　　2.4 观测指标 　　2.4.1 关节肿胀率 观察大鼠在整个实验过程中活动、毛色、饮食变化情况及四肢关节局部病变情况。于灌胃前及灌胃后1，2，3，4周用大鼠足趾容积测量仪测大鼠右侧关节的容积，计算其关节肿胀率，以第1天测值为基值，以后每测得的值与之相比所得比值为关节肿胀率。 　　2.4.2 IL-1、IL-33的测定 予乌拉坦腹腔麻醉后行股动脉取血于15 mL离心管中，静置20 min后，在4 ℃下2000 r·min-1离心15 min，取上清液分装于-20 ℃保存，用于ELISA法检测。具体按试剂盒内说明书操作，用酶标仪（450 nm）读取OD值，建立标准曲线