苯丙氨酸茉莉酸甲酯对百里香不定芽基础代谢及精油提取率影响.docVIP

苯丙氨酸茉莉酸甲酯对百里香不定芽基础代谢及精油提取率影响 　　摘要：以离体培养的百里香不定芽为材料，研究添加不同浓度苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MJ）对不定芽生长过程中基础生理代谢、精油提取率的影响。结果表明：添加供试浓度Phe、MJ显著提高了百里香不定芽中可溶性蛋白、可溶性糖含量，其含量随着Phe、MJ浓度的上升呈先上升后下降的趋势；适宜浓度的Phe、MJ增强不定芽中SOD、POD、PAL活性，抑制PPO活性，且具有明显的浓度效应，其中添加100 mg/L Phe、150 mg/L MJ效果最佳。在此基础上，提取了百里香精油，添加100 mg/L Phe、150 μmol/L MJ的提取率分别为042%、0.39%，分别比对照（0.31%）高35.5%、25.8%。 　　关键词：苯丙氨酸；茉莉酸甲酯；百里香；生理代谢；精油提取率 　　中图分类号： S567.23+9.01 　　文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）04-0245-05 　　百里香（Thymus vulgaris L.）是唇形科（Lamiaceae）百里香属（Thymus）多年生芳香植物，是一种重要的芳香和药用植物，同时也可作为环保、观赏以及蜜源植物，极具开发价值[1]。百里香植株花茎叶可提取芳香油，百里香精油是重要的天然香料、天然防腐剂以及天然抗氧化剂，具有广泛的商业价值[2-4]，其主要成分百里酚、香芹酚可以预防和治疗人类疾病[5]；同时百里香提取物还具有化感作用[6-7]，有望成为新型的生物除草剂。百里香精油的市场需求日益增大，但是野生百里香资源有限，而且栽培百里香的生长周期长且提取率很低。因此，人们开始尝试利用各种途径提高次生代谢产物的产量，其中刺激剂的利用是最有效的方法之一。 　　苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）是植物必需的一种氨基酸，它可以作为碳源以及通过参与蛋白质的合成来影响植物的生长发育；同时，在植物细胞的次生代谢中，苯丙氨酸还是合成一些木质素、生物碱、黄酮、异黄酮以及香豆素等次生物质的重要前体[8]。茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MJ）是一类新确认的植物内源生长调节物质，它能调节植物体保护酶活性及次生代谢酶类活性，促进基因表达，诱导蛋白质及次生物质的合成[9]。已有研究表明，用10 μmol/L苯丙氨酸处理大豆悬浮细胞48 h后，悬浮细胞中大豆素含量增加为对照细胞的1.3倍，同时染料木素含量增加为对照的1.38倍[10]。罗建平等报道，用200 μmol/L茉莉酸甲酯处理怀槐悬浮培养细胞9 d后，可以使悬浮细胞中的异黄酮含量增加41718%[11]。本研究主要探讨不同浓度的苯丙氨酸、茉莉酸甲酯处理对百里香不定芽中SOD、POD、PPO、PAL等保护酶活性以及可溶性蛋白、可溶性糖含量的影响，从而筛选出最佳添加浓度并进行精油的提取，为利用苯丙氨酸、茉莉酸甲酯调控百里香次生代谢产物含量提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试材料为百里香（Thymus vulgaris L.）不定芽，品种名为冬季百里香。 　　1.2 材料培养与处理 　　百里香不定芽培养的对照培养基为MS+0.25 mg/L NAA+0.25 mg/L 6-BA，附加0.6%琼脂、3%蔗糖；在对照培养基中分别添加50、100、150、200、250 mg/L苯丙氨酸组成5水平的苯丙氨酸处理培养基；在对照培养基中分别添加50、100、150、200、250 μmol/L茉莉酸甲酯组成5水平的茉莉酸甲酯处理培养基。灭菌前调节pH值至5.8～6.0，其中苯丙氨酸、茉莉酸甲酯采用过滤灭菌，每种培养基接种20瓶，每瓶接种0.5 g不定芽，培养室温度（25±2） ℃，光照度2 000～2 500 lx，光照周期12 h/d。 　　1.3 生理指标的测定 　　百里香不定芽生长60 d后，取各个处理的芽体较幼嫩部分0.5 g进行生理指标的测定，每个处理3次重复。采用考马斯亮蓝G-250测定可溶性蛋白鲜质量含量；蒽酮比色法测定可溶性糖鲜质量含量；依据超氧化物歧化酶（SOD）抑制氮蓝四唑（NBT）在光照下的还原程度来确定活性的大小，1 min 抑制NBT光化还原的50%为1个SOD活性单位（U）；过氧化物酶（POD）活性采用愈创木酚法测定，以1 min D470 nm变化0.01为1个酶活性单位（U）；多酚氧化酶（PPO）采用儿茶酚法测定，以1 min内D525 nm变化0.01为1个酶活性单位（U）；苯丙氨酸解氨酶（PAL）采用紫外吸收法测定，以1 min D290 nm变化0.01为1个酶活性单位（U）。以上生理指标的测定均参