羟基酪醇对过度训练大鼠心肌线粒体动力学蛋白及自噬水平影响.docVIP

羟基酪醇对过度训练大鼠心肌线粒体动力学蛋白及自噬水平影响 　　摘要：目的： 研究检测ET后心肌线粒体功能，观察羟基酪醇HT对线粒体功的保护效应，并通过关注动力学及自噬蛋白变化，探讨HT保护机制。方法： 80只SD大鼠随机分成4组，即：正常对照组（CON），正常加羟基酪醇组（CON+HT），过度训练组（ET）及训练加羟基酪醇组（ET+HT）。灌胃给药，剂量为25 mg/kg/d，每周训练时间为周一至周六，共8周，氧耗法测定线粒体呼吸功能。Westerblot法检测线粒体生物合成（PGC-1α），复合物（I，II，III，IV，V），动力学（融合：Mfn1/2，OPA1；裂解：Drp1）及自噬相关蛋白（Atg5，Beclin-1及Lc3-B）。结果： ET可显著性降低线粒体呼吸控制率（RCR）及磷氧比值（P/O），下调PGC-1α及复合物I，IV，V表达，增加线粒体裂解（Drp1），降低融合 （Mfn2，Opa1）。相对地，HT可有效提高线粒体P/O及复合物I，V表达水平；促进生物合成（Pgc-1α），提高融合（Mfn2，Opa1），降低裂解（Drp1）和自噬 （Atg5，Lc3-B）。结论：ET造成的心肌线粒体功能异常与动力学蛋白及自噬水平变化相关。HT对上述病理性变化的抑制作用可能是其发挥保护作用的重要机制。 　　关键词：过度训练；心肌；生物合成；裂解；融合；自噬 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1006-2076（2014）03-0051-06 　　收稿日期：2014-01-09 　　基金项目：国家青年科学基金资助项目。 　　作者简介：孙云彦（1982-），女，河南邓州人，在读博士，讲师，研究方向运动性疾病及康复。 　　作者单位：1.南阳理工学院体育教学部，河南 南阳473003；2.河南大学体育学院，河南 开封475000 　　山东体育学院学报第30卷第3期2014年6月 孙云彦，等羟基酪醇对过度训练大鼠心肌线粒体动力学蛋白及自噬水平的影响No.3 2014过度训练（excessive training，ET）是一种训练与恢复、运动与运动能力、应激与应激耐受性之间的失衡状态，是指机体由于疲劳的连续积累而导致机体出现功能紊乱或病理状态[1]。现已研究证实，过度训练可损伤机体循环系统，引起心肌能量代谢酶，抗氧化蛋白表达水平降低[2-3]及心肌细胞凋亡水平增加[4]。另有研究指出，过度训练还可直接造成心肌线粒体膜通透性转换孔的开放[5]。上述病理性改变，均与线粒体损伤及功能异常直接相关。然而，有关过度训练与心肌线粒体功能异常关系的研究却鲜有报道。 　　羟基酪醇（Hydroxytyrosol，HT）存在于橄榄叶提取物及橄榄油， 是一种多羟基酚类化合物。其分子式为C8H10O3，相对分子量为154.16。研究证实，羟基酪醇在心血管疾病[6-8]及衰老相关性退行性病变，如二型糖尿病[9]，代谢综合征[10]等的治疗中均有出色效果。推测，HT也能对过度训练造成的心肌损伤（线粒体功能紊乱）产生积极影响。另外，新近研究指出，线粒体动力学蛋白[11-12]和线粒体自噬[13]与其功能密切相关。众多与线粒体功能紊乱相关疾病的形成和发生均与动力学蛋白及自噬水平的病理性改变密切相关[11-12，14-16]。因此，线粒体融合，裂解和自噬成为近年来生命科学及医学领域内研究的新热点。 　　基于此，本研究建立了过度训练模型，并用HT作为干预手段，通过关注心肌线粒动力学蛋白及自噬水平的变化，探讨HT对心肌线粒体的保护作用及内在机制。 　　1材料和方法 　　1.1实验药剂 　　HT是由帝斯曼营养产品有限公司（Basel， Switzerland）提供的含量为15%的橄榄提取物粉末（19%总多酚）。抗体过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1 （Pgc-1） α，线粒体融合蛋白（Mfn） 1，2，裂解蛋白（Drp） 1购自于Santa公司 （Santa Cruz， CA，USA）；抗体GAPDH，视神经萎缩蛋白（Opa） 1，微管相关蛋白1轻链3（Lc3B），Beclin-1及 自噬蛋白（Atg） 5 购于Cell Signaling Technology （Danvers，MA，USA）。抗体线粒体复合物I，II，III，IV和 V来自于Sigma公司（Sigma，USA）。辣根过氧化物酶标记的羊抗兔及羊抗小鼠IgG抗体（GAPDH）及二抗购自于碧云天 （Beyotime，北京）公司；甘氨酸，Tris-base （AMRESCO，USA）；NC膜，ECL发光试剂购自于密理博 （MILLIPORE，USA）。 　　1.2研究对象 　　雄性Sprague dawley （SD）大鼠80只（购