百合的快速繁殖与多倍体新种质的培育-细胞生物学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 面合属多年生草本植物.具有较高的经济价值，是一种集观赏、食用、药用于一体的花 卉.并且是我国卫生部审批通过的首批药食两周植物。本试验在前人研究的基础上，对兰州 白合和川百合这两个品种进行了系统的组织培养研究，以期找到最佳的快速繁殖方式，为百 合大规模的 L厂化生产及国外自合优良品种的引种快繁和品种改良打下基础:同时还在组织 培养的基础上结合染色体工程技术对选育面合多倍体新种质的技术和方法进行了研究，以期 找到最佳的选育方法，为百合的倍性育种奠定基础，并且获得大量高产优质的同质多倍体新 种质可用丁-生产. 以取臼陕两省杨段的兰州西合、 J iI面合作为试验材料，建立了百合高效的离体再生体系， 对外植体不同消毒方式的筛选、外植体类型的选择、培养基的筛选、组培菌生根、移栽等方 面作了系统的研究.并成功的在试管内诱导出了百合小鳞茎，弥补了百合组织培养的不足之 处.为自合的快速繁殖提供了一条很有价值的新途径. 两种百合离体再生体系培养条件的探索结果表明 z 获得无菌的外植体是植物组织培养中 最基础的一环，因此外植体的灭菌效果和芽诱导率直接影响着试验的进程.筛选出的最佳消 毒方式，即以洗涤剂浸泡1O min，自来水神洗30min，15%的乙醇消毒 120s，0.1%的升京消毒 12min(升柔中滴加 1-2 滴 2%的吐混-20) ，无菌水冲洗4-6 次.可以获得 90%的芽诱导率， 污染率也仅为 2毡，出芽所需时间为 20-21d: 诱导芽分化的最适培养基川西合为 MS+1.Omg/L6-BA咱.lmg/LNAA+ 3%庶糖，二州西合为 MS+1.Omg/L6-BA +O.2mg/LNAA+3% 的!:糖: 芽继代增殖培养基川百合宜使用1. Omg!L6-BA +0. 5mg!LNAA+罚i!糖，兰州百合宣使用 。5.mg!L6-BA +0. Img/LNAA+5%庶糖:百合以鳞片为外植体效果较好，鳞片以鳞茎外层鳞片的 基部培养效果最好:试管内诱导形成鳞萃的最适培养基兰州百合为 1I2MS+0. 5mg/LIBA-3%!: 糖， JII 画合为 1!2MS+l.0mg!LlAA+孤a!:糖.两种自合所结鳞茎的部位不同.兰州白合是在基部 产生的平均多达 3.5 个，而川百合是在纽瑞苗顶端产生的，因而每株只能诱导形成 1 个小鳞 是:自合的生根相对来说较容易，是适生根培养基川百合的为1/ 2MS+0. 5mg!LIAA+2%?lf.籍，兰 州西合为1/2I1S+0. 2mg/LIAA+2%i!糖.生根率均可达到 100. 饰，平均生根条数川百合多达 8.2 ， 兰州西合多达 B. O. 在建立自合离体再生体系的基础上，利用秋水仙素癖液处理对兰州百合进行多倍体的诱 导.诱导方法采用了浸泡法和 l说培法，浸泡法义分浸泡无菌试管菌的方式和 l浸泡鳞瓣的方式. 结果表明z 两种方法中以浸泡法最佳，浸泡法中以浸泡无菌试管茵的方式效果最好.以 0.05% 的秋水仙素将液浸泡处理 25h 为处理的最佳组合，诱变产生的植株经染色体鉴定，其染色体 数日卫 2n=4X=48 ，属四倍体植株类1凹，诱导率最高可达 40.5%。 对获得的兰州西合同质四倍体与 L倍体进行了外部形态和细胞学的比较观察，结果表明: 在阿一生长阶段和环境条例 o r.，在叶片形态上，四倍体植株充分体现了器官的巨人;性.叫片 西南农业大学创 1 学位论文 的宽度和厚度均大 T倍体，序度为一倍体的 171艳，宽度为一倍体的 182%，叶形指数变小， J)一倍体的 49% ，方差分析差异车到极显若水平:叫片表面略显粗糙，有时还略思扭曲状:植 株较 一倍体粗壮，根系统二倍体的肥大:对获得的四倍体与一倍体法行了气孔特性的比役， 结果表明:四倍体保 11.细胞明显增大，纵径约为 一倍体的 16zt横径约为二」倍体的 151%. 保 fl细胞内叶绿体数目明显增多，约为马倍体的 204%. 气孔增大，氏度约为马倍体的 158%，宽 度约为一倍体的 138艳.而密度下降，约为二倍体的 6zt方差分析差异均达到极显著水平. 对诱导形成的兰州西合同质四倍体与二倍体进行了核型分析，染色体类型均由中部着丝 点 (m ).近端部着丝点 (st) 及端部着丝点 (t) 染色体组成，其核型公式四倍体为 2n=4X=48=1211吨111 (SAT) +20st+ 12t. 二倍体为 2n=2X=24 =6酣211 (SAT)+10st 崎t. 最氏族鱼体与 最短染色体的比值二倍体为 2. 町、四倍体为 2.35. 均在 2-4 之间:平均臂比值二倍