萝卜隐性核雄性不育系136A选育及其育性研究.docVIP

萝卜隐性核雄性不育系136A选育及其育性研究 　　摘要：本研究从自然群体中发现萝卜核雄性不育材料136A，通过创制178个杂交组合，经多代杂交，选育出具有50%保持能力的保持系136B。田间遗传试验结果表明，136A不育性状表现稳定，呈现出由隐性单基因控制的核不育遗传特点。细胞学观察显示该材料花粉败育彻底，花粉发育在四分体后开始发生异常，花粉败育主要由花粉壁破裂造成。PCR结果显示，该材料中不含有Ogura 雄性不育类型的主效基因orf138；线粒体和叶绿体测序结果也显示该材料具有正常的可育细胞质。 　　关键词：萝卜；核雄性不育；136A；保持系 　　中图分类号：S631.101文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）07-0026-06 　　萝卜是典型的异花授粉作物，杂种优势非常明显，利用雄性不育系进行杂交育种可以得到纯度高、性状好的杂交种，且制种过程简单，成本低[1]。雄性不育根据不育基因的遗传方式和在细胞中的定位分为细胞核雄性不育和细胞质雄性不育。目前生产上利用最多的萝卜不育系为Ogura类型的细胞质雄性不育系，它不仅在萝卜上使用，还被转育到大白菜、小白菜、甘蓝、油菜、菜花等其他十字花科作物中。单一化的雄性不育种质导致杂交种综合性状难以得到突破性的提高，对外界有害生物与环境的抵抗力非常低，存在潜在的生产风险，如1970年美国大面积种植T型细胞质的玉米杂交种，因玉米小斑病T小种的爆发流行，导致玉米产业遭受严重的经济损失。 　　细胞核雄性不育 （GMS）由细胞核不育基因控制，不受细胞质影响，没有正、反交遗传效应[2，3]。相对于细胞质雄性不育，核不育系具有育性稳定、恢复源广的优点。核不育现象十分普遍，已在294 种植物和21个种属间杂交组合中发现由细胞核基因控制的雄性不育类型[2，4，5]。目前，在十字花科植物中，细胞核雄性不育已经被应用在油菜、白菜、甘蓝等作物中。 　　相对于细胞质雄性不育，核雄性不育的保持系只有50%的保持率，在生产上很难直接利用，但通过不断发现新的核不育基因同样得到了保持率100%的保持系。陈凤祥等在甘蓝型油菜中发现一类新的细胞核雄性不育材料9012A受三对核基因控制，分别为两对隐性重叠不育基因和一对隐性上位可育基因[6]，并选育出具有100%保持能力的保持系。张书芳等在大白菜中利用核隐性基因和显性上位基因育出了能够100%保持的核雄性不育保持系[7]。通过类似的方法，科研工作者先后育成一些品种应用于生产[8～12]。随着生物技术的发展，核雄性不育材料具有更广阔的应用前景。美国杜邦先锋公司发明了一项杂交种子生产技术（Seed production technology，SPT），这种新的基因工程手段能够充分利用隐性核不育突变材料，将花粉育性恢复基因、花粉致死基因和标记筛选基因紧密连锁并导入核雄性不育突变体中，从而获得相应的保持系，有效解决了隐性核雄性不育系的繁殖难题，同时该方法还解决了产品的转基因问题，为隐性核不育材料的利用提供了新的模式[13]。 　　然而，在萝卜雄性不育系培育中，国内尚未有细胞核雄性不育材料的报道。本研究利用从自然群体中发现的萝卜雄性不育株为供试材料，通过田间育性遗传统计试验证明新发现的雄性不育材料为由一对隐性基因控制的核不育材料，填补了萝卜雄性不育资源中缺乏核不育材料的空白，为萝卜雄性不育系的培育与研究提供了重要的不育源。通过细胞学观察初步确定花粉败育时期及不同类型不育系花粉败育的差异。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　萝卜Ogura雄性不育系RS43，萝卜Ogura雄性不育保持系RS45及50余份国内外萝卜种质材料。 　　1.2试验方法 　　1.2.1萝卜核不育系的选育与遗传学验证2012年春于自然群体中发现1株不育株，命名为136A，以同一自然群体中的可育株作父本进行杂交，杂交组合31个；同时与5个不同品种的可育株进行杂交，杂交组合147个。每个组合后代F1及父本自交种子于当年秋季种于田间，调查育性。从中选出可以对不育材料136A保持的可育株为保持系136B。雄性不育株的标准为，雌蕊发育正常，雄蕊完全退化或不能形成有效花粉。 　　将不育材料与保持系的后代多代连续姐妹交，统计育性分离情况；将可育株自交，统计后代育性分离情况。 　　1.2.2花药发育细胞学观察以136A、RS43、136B的50个花蕾为试验材料。从现蕾期开始选取同一花序上不同发育时期的花蕾（从1 mm大小开始，直至开放前的花蕾），每个花蕾取一枚花药放于载玻片上，用镊子将花药研碎，用浓度为1%的醋酸洋红染液浸泡花药进行染色，盖上盖玻片，于显微镜（Leica DM5000 B）下分别观察3个材料不同时期的花药发育情况，并拍照。 　　1.2.3PCR验证利用CTAB