芍药甘草汤对中枢性肌张力增高大鼠脑内氨基酸及其受体影响お.docVIP

芍药甘草汤对中枢性肌张力增高大鼠脑内氨基酸及其受体影响お 　　[摘要]探讨芍药甘草汤对中枢性肌张力增高大鼠模型的神经递质及其受体的影响。采用线拴法所致的脑卒中恢复期痉挛性肌张力增高大鼠模型，以巴氯芬为对照，实验组给予芍药甘草汤3∶1配伍比例，给药3周后测定其神经功能评分、肌张力、痛阈的变化，并采用HPLC测定大脑皮层GABA，Gly，Glu，Asp含量，免疫组化法测定大脑皮层GABA受体Aα1，B与NMDA受体亚基NR1，NR2A，NR2B蛋白表达。结果显示芍药甘草汤3∶1配伍剂量组对脑卒中后痉挛偏瘫状态有较好的改善作用，能显著改善神经症状（P001），降低肌张力（P001），改善痛域（P005）；能够显著增加脑内抑制性氨基酸GABA，Gly的含量（P001），对于兴奋性氨基酸Glu，Asp有降低的趋势，但没有统计学意义；能够显著增强大脑抑制性神经递质受体GABA受体Aα1和B的表达 （P005），并减少大脑兴奋性神经递质受体NMDA各亚型NR1，NR2A，NR2B的表达（P005）。研究表明，芍药甘草汤3∶1配伍剂量具有较好的解痉止痛之效，不仅能够增加脑卒中后痉挛状态大鼠脑内抑制性氨基酸的水平，同时还可增加其受体的表达，从而增加抑制性神经信号转导的强度；对于脑内兴奋性氨基酸水平虽然没有显著性作用，但也有降低的趋势，同时对于兴奋性氨基酸受体的表达也有抑制作用，从而减弱兴奋性神经信号转导的强度，减轻兴奋性神经毒性。结果表明，芍药甘草汤可通过调节脑内抑制性和兴奋性神经能系统的平衡，从而达到缓解脑卒中痉挛状态，起到柔筋止痉的作用。 　　[关键词]芍药甘草汤；柔筋止痉；肌张力；氨基酸；氨基酸受体 　　芍药甘草汤是《伤寒论》中的名方，由芍药和甘草2味药组成，其配伍精当，具有酸甘化阴、养阴血、平肝阳、息肝风、柔筋脉、缓挛急、止疼痛的作用特点。原方虽为脚挛急所设，但后世医家根据其配伍特点，对其拓展发挥，用于治疗临床各科肌肉痉挛疼痛，对于卒中后痉挛偏瘫也取得了很好的疗效[13]。本课题组前期研究成功复制了脑卒中痉挛偏瘫大鼠模型，掌握了中枢性肌张力增高的变化规律，实验结果显示芍药甘草汤对脑卒中后痉挛偏瘫状态有较好的改善作用，能够显著改善神经症状，降低肌张力，改善痛阈，具有解痉止痛之效，其解痉止痛最佳配伍比例为3∶1（芍药甘草）[4]。但对于中枢性肌张力增高模型大鼠痉挛状态的生化基础，以及芍药甘草汤缓解痉挛的中枢机制还不十分清楚。本实验在前期研究的基础上，采用线拴法所致的脑卒中恢复期痉挛性肌张力增高大鼠模型作为实验对象，给予最佳配伍比例的芍药甘草汤，对其柔筋止痉的作用进行进一步的确认，同时对其脑内氨基酸及其受体进行测定，分析芍药甘草汤对痉挛偏瘫大鼠的中枢神经系统的影响，探讨其柔筋止痉的特色。 　　1材料 　　SD雄性大鼠120只，体重250～280 g，斯贝福（北京）实验动物技术有限公司提供，动物许可证编号SCXK（京 　　芍药甘草汤（18∶6）原料芍药，炙甘草购自北京圣惠堂中药饮片公司，药品生产许可证号分别为巴氯芬购自卫达化学制药有限公司，批号341101，规格80 mg?d-1。γ氨基丁酸（GABA），天门冬氨酸（Asp），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly）购自美国Sigma公司。邻苯二甲醛（OPA），碳酸钾，甲醇，醋酸，乙腈，磷酸二氢钾和硼酸购自北京国药公司分析纯试剂。γ氨基丁酸受体Aα1（GABARAα1），γ氨基丁酸受体B（GABARB），N甲基D天门冬氨酸受体1（NR1），N甲基D天门冬氨酸受体2A （NR2A），N甲基D天门冬氨酸受体2B（NR2B）等抗体购自abcam公司，货号分别为ab52177，ab90883，ab33299，ab69873，ab84184。 　　MedLabU/4CS生物采集系统购自南京美易科技有限公司；新航JZ100型张力换能器购自北京新航兴业科贸有限公司；高效液相色谱仪购自美国Agilent公司；JJ12J型脱水机购自武汉俊杰电子有限公司；JBP5型包埋机购自武汉俊杰电子有限公司；RM2016型病理切片机购自上海徕卡仪器有限公司；KDP型组织摊片机购自浙江省金华市科迪仪器设备有限公司；GT1001型组化笔购自Gene tech；Nikon Eclipse TiSR型倒置荧光显微镜，Nikon DSU3型成像系统购自日本尼康。 　　2方法 　　21动物分组及给药 　　取雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、阳性药组、芍药甘草汤组（芍药甘草18∶6）。造模后除去造模失败、死亡及无症状大鼠，并开始给药，巴氯酚按135 mg?kg-1灌胃给药，芍药甘草汤按生药浓度32 g?kg-1灌胃给药（人体重按60 kg计），假手术组和模型组