第一章节-蛋白质结构基础.pptVIP

18世纪中叶，Beccari从面粉中分离到一种粘性很高的物质，现知为谷蛋白。 Protein: G. J. Mulder 在1838年首次提出。蛋白质是细胞原生质的主要组成成分，其与核酸一起共同构成了生命的物质基础，约占细胞干重的70％以上 概念：蛋白质是由20种a-氨基酸以肽键相连构成的生物大分子,在体内执行多种生理功能 二、蛋白质的分类 依据形状、结构和溶解度等的不同，可以将自然界中的蛋白质分三类： 二、蛋白质的功能及其应用 第二节 蛋白质氨基酸与多肽链 一、天然常见氨基酸 二、肽单位和多肽链 三、α 螺旋 四、β层 一、天然常见氨基酸 构成蛋白质分子的基本化学单位是氨基酸。在所有蛋白质中常见的天然氨基酸共20种。 在有机体内通过生物合成连接成多肽链，其顺序由编码基因中的核苷酸三联体遗传密码决定。 1．基本结构 20种常见氨基酸中，19种都具有如下共同的化学结构： 另有一种脯氨酸具有类似而不相同的化学结构。它们的侧链与主链N原子共价结合，形成一个亚氨基酸。结构的特殊性决定了脯氨酸功能的特殊性。 三、肽和多肽链 1．肽键和多肽链 (1) 肽键 多肽链 二肽、…… …… 12肽 寡肽：20（12个）个氨基酸残基以下。 多肽：多于20个（25个）氨基酸残基的肽链。 N-端与C-端 氨基酸的顺序：是从N-端至C-端氨基酸残基。 肽的命名：Thr-Gly-Tyr-Ala-Leu T-G-Y-A-L 通常在多肽链的一端含有一个游离的?-氨基，称为氨基末端或N末端；在另一端含有一个游离的?-羧基，称为羧基末端或C末端。 二硫键： 胰岛素　 ※谷胱甘肽：γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸 肽平面、肽单位、双面角 肽平面：连接在肽键上的六个原子共处于一个平面上。 双面角：在多肽链里， Cα碳原子刚好位于互相连接的两个肽平面的交线上。 Cα碳原子上的 Cα- C 和 Cα– N 可以绕轴旋转，角度为ψ和φ，这就是α-碳原子上的一对二面角。它决定了由α-碳原子连接的两个肽单位的相对位置。其变化范围是±180o 蛋白质多肽链氨基酸序列的测定 要求 样品必须是均一的。纯度在　97% 以上 知道蛋白质的相对分子质量 1.测定蛋白质分子中多肽链的数目 经测定末端基（C端或N端），看蛋白质的摩尔数与末端基的摩尔数的比例？ 2.拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 1.借助非共价相互作用缔合的（亚基之间） 采用变性剂：8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；或高浓度盐溶液处理(拆分)。 2.通过共价二硫桥（S－S）交联的 采用氧化剂或还原剂：将二硫键断裂(常用过量的巯基乙醇)。 3.分离、纯化多肽链 二硫键的断裂 使用的还原剂有：巯基乙醇、巯基乙酸、二硫苏糖醇（DTT） ?-巯基乙醇　H0－CH2CH2－SH 巯基保护剂：碘乙酰胺、碘乙酸、3－溴丙胺等。 3.分析每一多肽链的氨基酸组成 待测样品经酸(6mol/L HCl)和碱(5mol/L NaOH)完全水解，用氨基酸分析仪进行测定（或层析法）。 表示方法：每摩尔蛋白质中含氨基酸残基的摩尔数。 或100克蛋白质中含氨基酸的克数。 4.测定多肽链的氨基酸序列 （1）N－末端氨基酸测定 Sanger试剂（二硝基氟苯法） DNS（丹磺酰氯法）： PITC（苯异硫氰酸酯、Edman法） 单肽链＋ PITC? PTC－多肽?酸性有机溶剂中加热 　　　　　　　　　　　　　　　　　?PTH－氨基酸 ＋ 余下的肽链 　抽提：用有机溶剂，层析鉴定。可连续降解几十个氨基酸残基 氨肽酶法 （2）C－末端分析 肼解法：单肽链＋无水肼?加热?氨基酸肼＋C－末端氨基酸?加FDNB 羧肽酶法(C-末端第二个是Pro时不作用） 羧肽酶A：能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸 羧肽酶B：只能水解 Arg和Lys为C-末端残基的肽键。 还原法：单肽链＋硼氢化锂?C－末端氨基酸被还原成相应的α－氨基醇　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　?水解，层析 （3）多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化 要求：选用专一性强的、断裂点少的、反应产率高的蛋白水解酶或化学试剂进行有控制的裂解。后将所得混合物进行分离纯化。经N未端和C未端测定，确定出每一肽段的序列。 酶解法（表现出专一性） 　胰蛋白酶： 水解Lys、Arg的羧基所形成的肽键。 　糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）：R1＝ Phe、Trp、Tyr 　嗜热菌蛋白酶：胃蛋白酶：氨肽酶和羧肽酶： 化学法 　溴化氰水解法(CNBr):切割　Met　的羧基所形成的肽键。 　用羟胺断裂:它断裂－Asn-Gly-,但专一性不高。蛋白质中　　　　出现机率