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藤本豆秸秆发酵生产乙醇工艺研究 　　【摘 要】目的：研究藤本豆秸秆被稀硫酸预处理后，经纤维素酶转化，并利用混合菌发酵生产乙醇的工艺条件。方法：以吉林省九台市郊当年产藤本豆秸秆为研究对象，用1.0 %的稀硫酸预处理，用里氏木霉生产纤维素酶，在纤维素酶、热带假丝酵母、酿酒酵母共同作用下采用同步糖化共发酵法生产乙醇。结果纤维素酶生产的最适条件为：藤本豆秸秆由稀硫酸处理后，滤渣中添加适量营养，接入1.5×107～2.0×107个/g底物Trichoderma reeseiTJK108孢子悬浮液，于30℃固态培养7d。最适发酵条件为：发酵温度30℃，发酵周期72h，转速120r/min，纤维素酶用量40IU/g（对底物），热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1，酵母菌接种量为10%。在最适发酵条件下，乙醇产率为0.30g/g（乙醇/藤本豆秸秆），比其他试验组产率都高。结论：藤本豆秸秆是价廉易得和来源丰富的可再生资源和能源，被纤维素酶转化后可以生产乙醇部分替代石油。 　　【关键词】藤本豆秸秆；纤维素酶；热带假丝酵母；酿酒酵母；乙醇 　　一、材料与方法 　　1.材料。藤本豆秸秆，取自吉林省九台市郊，当年产。菌种：纤维素酶产生菌（Trichoderma reesei TJK108）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae SQY-002），由吉林工程技术师范学院食品工程学院实验室保存。热带假丝酵母（Candida tropi 　　calis），购于中国菌种保藏中心。液体种子培养基：YEPD培养基。发酵培养基：取一定量预处理后的藤本豆秸秆，冷却后用30%的NH4HCO3调节pH=4.8，并于121℃下湿热灭菌20min。 　　2.藤本豆秸秆生产乙醇的总工艺流程（图1）。（1）藤本豆秸秆的预处理。采用稀硫酸预处理玉米秸秆，将玉米秸秆风干后磨碎，于75℃烘箱中烘一昼夜至水分含量恒定，与1.0 %的稀硫酸按一定比例混合（固液比为1：10），121℃下蒸煮120min。（2）纤维素酶的生产―Trichoderma reesei TJK108的固态培养。采用固态发酵工艺。取预处理后的藤本豆秸秆，过滤，滤渣用水和丙酮洗至pH 值呈中性，其主要成分为纤维素。添加0.2%KH2PO4，0.2%MgSO4?7H2O，3%（NH4）2SO4，0.2%吐温-80，10%酒糟，调节pH值至4.8，含水量至70%，121℃灭菌60min，接入1.5×107～2.0×107个/g底物Trichoderma reesei TJK108 孢子悬浮液，于30℃培养，发酵7d。 　　（3）菌种活化与稀释。从试管斜面上分别取热带假丝酵母和酿酒酵母，在YEPD液体培养基中活化（150r/min，30℃，18h）血球计数板计数，并稀释至108个细胞/ml。（4）酵。向发酵培养基中添加适量的纤维素酶，按10%（体积比，下同）的接种量接入一定比例的热带假丝酵母和酿酒酵母，根据影响发酵的条件进行发酵试验，并选取乙醇产率（乙醇/藤本豆秸秆，g/g）作为测试指标。一是最佳温度的确定。藤本豆秸秆在不同温度下进行发酵（发酵周期为72h，转速为120r/min，纤维素酶用量为40IU/g对底物，热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1，酵母菌接种量为10%），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳温度。二是最佳时间的确定。藤本豆秸秆在不同时间下进行发酵（发酵温度为30℃，转速为120r/min，纤维素酶用量为40IU/g对底物，热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1，酵母菌接种量为10%），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳时间。三是最佳转速的确定。藤本豆秸秆在不同转速下进行发酵（发酵温度为30℃，发酵周期为72h，纤维素酶用量为40IU/g对底物，热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1，酵母菌接种量为10 %），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳转速。四是最佳纤维素酶用量的确定。藤本豆秸秆在不同纤维素酶用量下进行发酵（发酵温度为30℃，发酵周期为72 h，转速为120r/min，热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1，酵母菌接种量为10%），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳纤维素酶用量。五是最佳酵母菌接种量的确定。藤本豆秸秆在不同酵母菌接种量下进行发酵（发酵温度为30℃，发酵周期为72h，转速为120r/min，纤维素酶用量为40I 　　U/g对底物，热带假丝酵母与酿酒酵母的接种比2：1），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳酵母菌接种量。六是最佳酵母菌接种比例的确定。藤本豆秸秆在不同酵母菌接种比例下进行发酵（发酵温度为30℃，发酵周期为72h，转速为120r/min，纤维素酶用量为40IU/g对底物，酵母菌接种量为10%），分别测定乙醇产率，确定发酵的最佳酵母菌接种比例。（5）蒸馏。取