西南红山茶组培快繁过程中初代培养基筛选.docVIP

西南红山茶组培快繁过程中初代培养基筛选 　　摘要：山茶花是我国十大传统名花之一，具有很高的观赏价值和园林应用前景。本试验以西南红山茶带芽茎段为材料，在MS培养基上添加不同浓度的6-BA和NAA，研究不同培养基配方对外植体启动率的影响。结果表明：在初代MS培养基中，当NAA为0.2mg/L，6-BA为2.0mg/L时，启动率最高，为71.1％；且侧芽高度最高，平均高度为1.73cm，启动效果最好。单独分析了6-BA与NAA不同浓度分别对外植体启动率和侧芽高度的影响，得出6-BA对外植体侧芽高度具有显著的影响，而NAA对外植体的启动率具有显著的影响。 　　关键词：西南红山茶；组培快繁；初代培养基 　　 　　山茶花传统的繁殖方法主要有播种、嫁接、扦插及压条等，但因其生根较困难和繁殖率低等原因，很难进行大规模地开发推广；且品种退化现象非常严重。将植物组织培养技术应用于攀西西南山茶的快速繁殖，对保护攀西地区野生西南山茶种质资源，丰富园林植物多样性，缓解优质种苗供应紧张的状况，具有十分重要的意义。鉴于此，本文对西南红山茶进行组织培养初步研究，力求为西南红山茶的推广利用和工厂化育苗提供一些理论依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　本次试验以生长旺盛且无病虫害的西南红山茶新梢顶端作为材料，截取2.0～5.0cm的带芽半木质化茎段，用1％洗衣粉水漂洗10min，漂洗2次，用自来水冲洗干净，然后再用自来水冲洗2 h，滤干水，于超净工作台上，无菌条件下用0.1％升汞溶液进行浸泡，摇动消毒6min，最后用无菌水冲洗4～5次。将已消毒好的茎段从原切口处剪掉，使之露出新切口，同时剪切成1.0～2.0cm长的小段，每一小段都带有1个茎节，这样有利于侧芽长出口。将切出的小段，于芽朝上接入附加不同浓度的6-BA(1.0mh/L、2.0mg/L、3.0mg/L)和NAA(0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L)的MS启动培养基上进行初代培养，MS中添加琼脂7g/L、蔗糖30g/L，pH 5.8～6.0。本试验设置9个处理，每个处理接种30个外植体，重复3次。外植体以插入培养基刚稳为宜，每瓶接种1个外植体，迅速系好试管，移至培养室内培养。培养条件为：温度24～28℃，光照强度1500～2000Lx，光照时间每天12h。数据采用Excel 2003和SPSS 16.0进行统计分析。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　不同生长调节剂浓度对外植体启动率的影响 　　茎段接种约10d后开始出现基部膨大现象，同时顶端切口处开始出现愈伤组织，30d左右顶端愈伤组织开始分化出不定芽，50d左右基本能形成1～4个不定芽。试验比较结果表明，5号处理(NAA 0.2mg/L，6-BA 2.0mg/L)诱导率为71.1％，诱导率最高，诱导效果最佳，显著高于其它各处理；3号处理(NA.A 0.1mg/L，6-BA 1.0mg/L)诱导率为30.0％，诱导效果最差，显著低于其它各处理。由图1可知，4号处理(NAA 0.2mg/L，6-BA3.0mg/L)和6号处理(NAA 0.2mg/L，6-BA1.0mg/L)诱导效果也较好，分别为54.5％和57.8％，仅低于5号处理。 　　 　　2.1.1　不同NAA浓度对启动率的影响。由图1可知，5号处理诱导率为71.1％，明显高于2号处理(NAA0.1mg/L6-BA2.0mg/L)的46.7％和8号处理(NAA 0.3mg/L，6-BA 2.0mg/L)的51.1％，说明在6-BA浓度一定时，NAA浓度对外植体的启动率有一定的影响。经方差分析可知，见图2(A)，NAA浓度对诱导率的影响呈正态分布趋势，NAA浓度为0.2mg/L时，平均启动率最高，为61.13％，明显高于0.1mg/L的39.27％和0.3mg/L的44.82％，差异显著。 　　2.1.2　不同6-BA浓度对启动率的影响。由图1可知，5号处理诱导率为71.1％，显著高于4号处理的54.5％和6号处理的57.8％，说明6-BA的浓度对外植体的诱导率也有影响。由图2(B)可知，6-BA浓度为2.0mg/L时，平均启动率最高，为56.3％，分别高于1.0mg/L的47.4％和3.0mg/L的41.5％，处理间差异显著。 　　 　　 　　2.2　不同生长调节剂浓度对侧芽高度的影响 　　经方差分析可知，不同生长调节剂浓度对侧芽高度的影响差异显著(F=8.193，Sig=0.000)。由图3可知，5号处理侧芽高度最高，平均高度为1.73 cm，8号处理和2号处理侧芽高度也较高，分别为1.60cm和1.50cm，且此3个处理之间的差异不显著，说明三者都具有明显侧芽高度优势；1号处理和3号处理侧芽高度最低，都为1.10cm。