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PAGE 16 毕业论文实验报告 学生姓名： 石书鹏 学 号： 学　　院：　　 生命科学与技术学院 专 业： 08生物工程2班 论文题目： 木瓜多糖的提取工艺研究 指导教师： 吴耀辉 副教授 评阅教师： 王 卫 讲师 2012年4 月20日 本课题要研究或解决的问题和拟采用的研究手段（途径）： 本实验对木瓜中水溶性多糖的提取工艺进行了研究，多糖类化合物具有强亲水性，极易溶于水，和在亲水性比较强的乙醇中也难于溶解的性质，确定采用水提醇沉（水作为溶剂，乙醇来沉淀多糖）的方法提取多糖。分析提取时间、提取温度、固液比、提取次数对多糖提取率的影响，确定其最佳工艺条件。并且对多糖的抗氧活性进行探讨，为木瓜的综合利用提供依据。 1 材料与仪器 1.1 原料 新鲜木瓜 1.2 试剂 95 %乙醇，无水乙醇（分析纯），苯酚（分析纯），浓硫酸（分析纯），蒸馏水，葡萄糖（分析纯）等 1.3 仪器 电子天平，粉碎机，鼓风干燥机，布氏漏斗，高速离心机，旋转蒸发仪，恒温水浴锅，752C紫外分光光度计，滴管，移液管，漏斗，烧杯，滴定管，锥形瓶等。 2 实验方法 2.1 粗多糖提取及纯化步骤 2.1.1 木瓜处理 新鲜木瓜，洗净后，在温度50 ℃下烘干，经粉碎机粉碎后过60 目筛，收集粉末。 2.1.2 浸提 称取一定量的木瓜粉加入适量蒸馏水，在设定条件下恒温浸提，并不断搅拌。 2.1.3 过滤离心 将提取液用滤纸进行抽滤，弃掉滤渣,得澄清浸提液。浸提液用台式高速离心机进行离心5 min，转速3500 r/min。 2.1.4 浓缩 将离心后的浸提液放入旋转蒸发仪中浓缩到原体积的1/5。 2.1.5 醇沉 将浓缩后的提取液加入4 倍体积的 95 % 的乙醇溶液中，静置24 h以上。 2.1.6 离心 将用醇沉淀的多糖液离心，并用无水乙醇洗涤2 次～3 次，再次离心（转速3500 r/min，时间5 min），收集沉淀物。 2.2 粗多糖的含量测定方法 2.2.1葡萄糖标准曲线的绘制 精确取称110 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品25 mg，置于250 ml容量瓶中，制得浓度为0.10 mg/ml的葡萄糖标准溶液，准确移取标准溶液0.00 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.60 ml、0.80 ml、1.00 ml、1.20 ml、1.40 ml、1.60 ml、1.80 ml、2.00 ml浓度为0.10 mg/ml的葡萄糖溶液，分置于试管中，各加蒸馏水补足至每管2.00 ml。在各管中加入5.00ml显色液，然后振荡混匀，置于沸水浴中加热30 -35min，流水冷却，于波长490 nm处测定吸光度值。以吸光值A为纵坐标 溶液浓度 (mg/ml)为横坐标绘制标准曲线。 2.2.2粗多糖含量的测定 将纯化后的木瓜多糖粗品溶解，定容到100 ml。用移液管移取1.00 ml样液置于试管中，再用移液管加入显色液5ml，于沸水浴中加热30-35 min 后于波长为490 nm的分光光度计中测量吸光度。根据标准曲线、回归方程计算粗多糖含量，再由含量求出木瓜竹叶中多糖的含量。 计算公式为： C×V×n 木瓜多糖提取率= ×100% （1） m 式中： C — 提取液中木瓜多糖的浓度（g/ml） m — 称取的木瓜质量（g） n — 稀释倍数 V — 粗多糖（m1） 3实验结果 3.1葡萄糖标准曲线的绘制 表1 葡萄糖浓度与吸光度的关系 葡萄糖浓度mg/ml 0.0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 吸光度/A 0.000 0.102 0.259 0.349 0.387 0.523 0.657 0.785 0.921 根据表1的数据，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，如图1。 图1 葡萄糖标准曲线 由图1可知，葡萄糖与吸光度呈良好的线性关系，其回归方程： y=11.172x-0.0043 式（3） 相关系数:R2=0.9905 式中x为葡萄糖浓度，y为吸光度。 3.2不同单因素条件对木瓜多糖得率影响的研究 本试验首先主要