全反式维甲酸对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及cyclin某2cp16表达的影响.pdfVIP

材料和方法 (三)主要仪器 LS6500 IX70液体闪烁计数仪：美国BECKMAN 电泳仪：北京六一仪器厂 电转移装置：Bio-Rad公司 37。C二氧化碳培养箱：同本SANYO 倒置相差显微镜：日本Olympus 计算机图像分析仪：德国蔡司公司VIDAS21图像分析系统 超净工作台、普通光学显微镜及照相装置均为国产仪器。 二、方法 (一)血管平滑肌细胞培养 1．原代培养： 采用酶消化法培养”3。将大鼠断颈处死．酒精浸泡5分钟后取出，于无菌操作 下分离并胸腹段主动脉长约3cm，两端结扎后取出，蒸馏水清洗后，放入盛有无血 清DMEM培养基的培养皿中。用镊子撕去血管外结缔组织，用眼科剪纵行剖开血 管，刀片轻刮内膜层以除去内皮细胞，用镊子撕下动脉中膜层．以Hank’s液冲洗三 的DMEM培养液中。将组织块集中移放入0．2％胶原酶溶液中，于37度振荡培养箱 离心七分钟，弃上清，加入含20％FCS的DMEM培养液，经台盼兰染色细胞计数