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超高效液相质谱联用鉴定云南雪胆和云南地不容研究 　　[摘要] 目的 用超高效液相-质谱联用（UPLC-MS）鉴定云南雪胆和云南地不容。 方法 通过UPLC-MS检测云南雪胆和云南地不容，得到其主要成分的质谱图，通过分析各离子峰得到分子量。 结果 云南雪胆的主要成分是雪胆甲素，云南地不容的主要成分是左旋四氢巴马汀，检测结果与文献报道结果一致，两种药材得到鉴别。 结论 采用UPLC-MS检测天然产物，可以在不分离纯化的前提下，快速确定其主要成分，方法可靠，结果准确。 　　[关键词] 云南雪胆；云南地不容；UPLC-MS 　　[中图分类号] RTS254.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）02（b）-0112-02 　　云南雪胆（Hemsleya sinesis Cogn of Yunnan）为葫芦科（Cucurbitane）雪胆属（Hermleya）植物的干燥块根，具有清热、解毒、消肿止痛的功效，民间用来治疗肝炎、气管炎、胰腺炎、慢性子宫颈炎、带状疱疹、肿瘤等[1-5]。云南地不容（Stephania yunnanensis H.S.Lo）为防己科（Menisermaceae）千金藤属（Stephania）植物的干燥块根，具有清热、解毒、镇静、止痛、理气等功能，民间用于治疗风湿骨痛、胃痛、毒蛇咬伤等[6-7]。云南雪胆和云南地不容均为云南著名的传统中草药，民间使用较为广泛，二者均为干燥块根，从外形上看极其类似，很容易混淆，给人们的使用带来诸多不变。因此，建立一种快速检测方法，以区分两种药材是非常必要的。 　　超高效液相-质谱联用（UPLC-MS）作为一种新的检测技术，广泛用于各种分析检测领域，它可以同时获得液相色谱和质谱图，根据离子流信息计算出化合物的分子量，分析各种离子碎片可以确定化合物的结构式，从而在样品不纯时便能知道其主要成分，这对于天然产物的研究极为重要。本研究采用UPLC-MS对云南雪胆和云南地不容进行检测，从而建立一种鉴别两种药材的快速检测方法，为研究和使用两种药材提供一定依据。 　　1 材料与仪器 　　云南雪胆和云南地不容药材购自云南省药材公司（分别产自云南西双版纳和云南文山），经大理学院药学院周浓副教授鉴定为葫芦科雪胆属植物雪胆Hemsleya sinesis Cogn of Yunnan和防己科千金藤属植物云南地不容Stephania yunnan ensis H.S.Lo的干燥块根；标准品左旋四氢巴马汀Tetrahydropalmatine和雪胆甲素Cucurbitacin Ⅱa购于中国科学院上海药物研究所国家重点实验室；实验试剂均为色谱纯，实验用水为纯净水。电子分析天平（Startorius CPA225D）；液相色谱/单极四级杆质谱仪（Waters，ACQUITY SQD LC/MS System）；C18反相柱（Waters，ACQUITY UPLC BEH C18，1.7 μm，2.1 mm×100 mm）。 　　2 方法与结果 　　2.1 供试品的制备 　　分别将云南雪胆和云南地不容块状根粉碎，各取5 g置于250 mL茄形瓶中，加入95%乙醇各125 mL，于80℃下水浴加热2 h，滤去残渣，分别将提取液减压蒸干至无醇味。分别将提取物用甲醇溶解置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品。 　　2.2 UPLC条件 　　检测样品采用超高效液相色谱仪（Waters，ACQUITY UPLC H-class core system），配有超高效液相紫外检测器（Waters，ACQUITY UPLC TUV Detector），色谱柱采用C18反相柱（Waters，ACQUITY UPLC BEH C18，1.7 μm，2.1 mm×100 mm），柱温45℃。乙腈为色谱纯（Merck，gradient grade for liquid chromatography），水为纯净水。展开剂采用乙腈-水，从10%（V/V）到100%乙腈梯度洗脱，时间为6 min[8]。 　　2.3 UPLC-MS检测 　　采用液质联用仪（ACQUITY SQD LC/MS System）进行检测，单四极杆质谱检测器，ESCI离子源，电喷雾所用气体为氮气。 　　2.4 检测结果 　　云南雪胆和云南地不容经UPLC-MS检测，结果见图1、2。图1A中，所含主要成分保留时间为2.56 min，在负离子谱（图2A）中观察到负离子峰如下：561.5（[M-H]-），607.5（[M+COOH]-），1169.8（[2M+COOH]-）。在正离子谱（图2B）中观察到正离子峰如下：503.4（[M-AcO]+），1147.6