第12章 UV.ppt

第十章 紫外-可见分光光度法 概述 基本原理和基本概念 紫外-可见分光光度计 分析方法的应用 概 述 （Ultraviolet and Visible Spectrophotometry，UV-vis），200~800nm 分子吸收光谱法； 电子光谱 定性、定量分析； 灵敏度高、准确性好、仪器简单、应用广泛。 A=-logT = log I0/I = ECL T = I / I0 条件 吸光系数 摩尔吸光系数（ε） 百分吸光系数 两者的关系 某化合物的摩尔质量为200.0，将其配成200ml含0.4000mg的溶液，盛于1cm比色池中，在340 nm处A值为0.4200，求其ε及 =0.4200 ÷ (0.4000 ×10-3 ÷2)=2.100 ×103 ε＝200.0 ×2.100 ×103÷10 ＝4.200 ×104 下列四种因素中，决定吸光物质摩尔吸光系数大小的是哪一个？??? ?A. 吸光物质的性质；? B. 光源的强度；??? C. 吸光物质的浓度；? D. 检测器的灵敏度。 （2）光学因素 非单色光 杂散光 散射光和反射光 非平行光 （二）电子跃迁的类型 1.电子轨道的形成 2.跃迁类型 π→π* 共轭引起的吸收带红移 乙烯lmax = 185nm 丁二烯lmax = 217nm 己三烯lmax = 258nm 下列化合物中，在近紫外光区中有两个吸收带的物质是哪个？?? A．丙烯；??B．丙烯醛；? ?? C．1，3－丁二烯；?D．丁烯 下面几个化合物中跃迁所需能量最大的是（ ） A、1，4－戊二烯 B、1，3－丁二烯 C、1，3－环己二烯 D、2，3－二甲基－1，3－丁二烯 2.生色团、助色团 生色团（chromophore） C＝C、C＝O等(含有π电子，都发生π→π* 或n→π*跃迁); 助色团（auxochrome） 如，－OH、－OR等(含有饱和的杂原子)。 3.红移、蓝移 4. 吸收带 R带:n →π* ； 270～300nm,吸收强度弱 丙酮?max =279nm， εmax=15； 随溶剂极性增加，吸收波长蓝移（短移）； K带 共轭π→π* ； 吸收强度强 随溶剂极性增加，吸收波长红移（长移）。 （一）基本组成 general process 2.单色器 （二）分光光度计的类型 types of spectrometer 三. 紫外光谱的应用 （一） 定性鉴别 依据 吸收光谱的特征； 方法 对比法； 比较?max 和εmax（或E 1%） 比较不同吸收带的A或E的比值 比较吸收光谱的一致性 例2：维生素B12的鉴别 注意：具有相同结构的两种物质，在相同条件下测得的紫外光谱完全相同，但相反的情况并非一定成立。 （二） 纯度检查 杂质检查 杂质限量检测 （三） 定量分析中的应用 依据是朗伯-比尔定律和吸光度加和性。 1.单组分定量 吸光系数法 直接比较法 CX/CS＝AX/AS 校正曲线法 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度。 2.多组分定量——计算分光光度法 利用吸光度加和性； 例如两组分同时测定，选2个不同波长分别测得吸光度A?1和A?2 ； 建立联立方程 （四）光电比色法（可见分光光度法） 测定有色溶液 无色→有色； 测定的关键是 选择合适的显色剂和显色条件； 控制显色反应的条件； 测定方法 校正曲线法 黄酮类（苯并γ吡喃酮） Amino Acids Analyzer 显色反应及其条件 (1)要求： ①定量关系 ②稳定性 ③最大吸收波长差异 ④ε较大 ⑤选择性 (2)反应条件的影响 试剂与溶剂、酸碱度、反应时间及温度等。 (3)反应条件的控制 要考察显色稳定的时间、考察试剂用量。 邻二氮菲比色法测定水样中铁的含量 我国规定，饮用水中的铁含量应＜0.3mg/L 基本原理 邻二氮菲 + Fe2+→邻二氮菲-Fe（Ⅱ）配位物 生成的邻二氮菲-Fe（Ⅱ）配位物lgβ3=21.3，摩尔吸光系数达1.1×104，反应灵敏，适用于微量铁的测定。 当铁为三价时，可用盐酸羟胺还原，反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2↑+4H++2H2O+2Cl- 反应在pH4.5～5的缓冲溶液中进行，含铁量在0.5～8 mg/L范围时，其浓度与吸光度符合Beer定律。 铁含量的测定 ①标准曲线的绘制 a.用移液管吸取铁标准溶液（100μg/ml）10ml于100 ml容量瓶中，加入2ml盐酸，用水稀释至刻度，摇匀。即为10μg/ml的铁标准溶液。 b. 用吸量管吸取0.0、0