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采用组织芯片研究非小细胞肺癌中肿瘤转移相关基因1血管内皮生长因子C表达及意义 　　[摘要] 目的 采用组织芯片技术研究非小细胞肺癌中肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达，分析其临床意义及其相关性。 方法 制作186例非小细胞肺癌组织及23例正常肺组织芯片，用免疫组化S-P法检测组织芯片中肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达。 结果 在非小细胞肺癌中，肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达阳性率分别为62.8%（103/186）和64%（119/186），与正常肺组织中的0（0/23）和17.4%（4/23）相比，差异有高度统计学意义（P 0.05）。肿瘤转移相关基因1阳性表达与血管内皮生长因子C阳性表达有关（P 0.01）。 结论 肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C在非小细胞癌的发生发展过程中起着关键作用，联合检测肿瘤转移相关基因1和血管内皮生长因子C可作为判定非小细胞肺癌侵袭性和转移性的重要方法。 　　[关键词] 非小细胞肺癌；肿瘤转移相关基因1；血管内皮生长因子C；转移 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）01（a）-0015-03 　　肺癌发病率和死亡率均居恶性肿瘤首位，严重威胁人类健康[1]。肿瘤的侵袭和转移是肿瘤的重要生物学行为特征，也是患者死亡的最主要原因。淋巴结转移是非小细胞肺癌重要的转移途径，血管内皮生因子C（vascular endothelial growth factor C，VEGF-C）是特异性的新生淋巴管刺激因子，能够促进毛细淋巴管的新生并增加淋巴管内皮的通透性，从而导致肿瘤转移更易发生[2]。肿瘤转移相关基因（metastasis-associated gene 1，MTA1）是MTA（metastasisassociated）家族成员之一，被认为是核小体重构及组蛋白脱乙酰基酶复合物的组成部分，其表达的增高与多种上皮性恶性肿瘤的侵袭转移密切相关[3]。本实验对MTA1和VEGF-C的表达进行检测，结合临床、病理资料，分析它们与临床因素之间的相关性，探讨它们与非小细胞肺癌侵袭和转移之间的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集解放军第八一医院全军肿瘤中心2008年1月～2010年3月的186例肺癌切除手术标本。男137例，女49例，年龄31～75岁，中位年龄55岁。肺鳞癌105例，其中低分化42例，中分化37例，高分化26例。肺腺癌81例，其中低分化35例，中分化32例，高分化14例。TNM分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期72例，Ⅲ期61例，Ⅳ期13例。同时收集23例距肿瘤边缘5 cm处的正常肺组织为对照。 　　1.2 试剂 　　羊抗人MTA1多克隆抗体和VEGF-C多克隆抗体均购自Santa Cruz公司，即用型免疫组化超敏S-P试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物试剂开发公司。柠檬酸抗原修复缓冲液、PBS缓冲液、苏木素染色剂、中性树胶封片剂、多聚赖氨酸、石蜡、各种浓度乙醇、甲醛等，均来自解放军第八一医院病全军肿瘤中心的病理科。 　　1.3 方法 　　1.3.1 组织芯片制作 从病理科的存档中选取各型非小细胞肺癌蜡块，同时调阅相应的HE染色组织切片及患者的病历资料，同时新近收集肺癌及正常肺组织制备组织蜡块。将所有非小细胞肺癌组织蜡块分类登记，按文献要求进行设计[4]。对每一组织标本，均先观察苏木精-伊红切片以确定肿瘤部位，每一例肺癌蜡块选取4点、正常组织蜡块选取2点，共制成20×12阵列块。 　　1.3.2 免疫组化方法 采用S-P方法，柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复。在染色中，各种抗体染2张TMA的连续切片。另外还选择了10例相应非小细胞肺癌组织标本，作常规HE切片染色来验证组织代表性。阴性对照以PBS代替一抗。阳性对照以相应抗体的已知阳性切片作对照。结果判定：以非小细胞肺癌胞核或胞浆内出现黄色至棕褐色颗粒，定位较明确、染色明显的切片视为表达阳性。表达强度的分析，笔者采用每个切片选取5个视野，Image-Pro Plus（Media Cybe Netics Inc，USA）图像分析系统进行分析，测算单位面积平均光密度（OD）值。 　　1.4 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 12.0处理。计数资料采用百分率表示，组间对比采用χ2检验。相关性分析采用Pearson相关分析，以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 MTA1蛋白的表达 　　MTA1蛋白表达定位于非小细胞肺癌的细胞核，呈明显的棕黄色颗粒状。23例正常肺组织中均无阳性表达。在186例非小细胞肺癌中，共有阳性染色103例（阳性率为62.8%）；其中有淋巴结转移的117例非小细