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金花葵花总黄酮精制工艺研究 　　摘要：通过静态吸附解吸试验从12种树脂中优选出聚酰胺树脂，其吸附率为38.20%、吸附量为43.93 mg/g，解吸率73.22%，综合吸附解吸效率最高。聚酰胺树脂动态吸附解吸试验结果表明，在提取液上样量50 mL、上样液浓度4.37 mg/mL、上样pH值6.0、上样流速1.0 mL/min、水洗体积5倍、80%乙醇5倍体积洗脱、洗脱流速1.0 mL/min的最佳条件下，金花葵花总黄酮纯度可达到72.6%，产品具有很大的开发潜力。 　　关键词：金花葵；黄酮；聚酰胺树脂；纯化工艺 　　中图分类号： R284.2文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2016）08-0339-04 　　金花葵（Hibiseu smanihot L.）别称菜芙蓉、野芙蓉、黏干、山榆皮，为一年生草本锦葵科秋葵属植物[1]。 　　金花葵含有丰富的黄酮类化合物和Mn、Fe、Mg、Zn、Cu、Cr等微量元素，能显著调节人体内分泌、免疫力，增强人体抵抗力，增强机体抗氧化能力，具有抗衰老、防癌、降血脂等功效。金花葵含有丰富的金丝桃苷[2]，对神经、循环、免疫、消化系统等具有调节活性，有抗炎、止咳，以及较强的抑制糖醛还原酶活性的作用，具有一定的抗抑郁功效。 　　金花葵适应性强，可广泛种植，含有极为丰富的黄酮类化合物，是黄酮类化合物提取的较佳原料。但因其发现时间短，研究还不够深入，其黄酮类化合物的提取分离方法还不够完善，关于其生理活性方面的研究还不够深入。 　　本试验研究了12种树脂对金花葵花总黄酮纯化效果，通过静态试验从中筛选出纯化效果最优的树脂，并进行了动态试验，得出树脂纯化就金花葵花总黄酮的最优工艺参数。 　　1材料与方法 　　1.1材料与仪器 　　金花葵由河南平顶山军昊农业有限公司提供；HPD100、HPD400、HPD500、HPD722、HPD826、HPD100B、AB-8、S-8、X-5、D4020、聚酰胺、XDA-7PH型树脂均为河北沧州宝恩化学有限公司生产；芸香苷对照品（纯度98%）为江苏南京苏朗医药科技开发有限公司生产；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇均为分析纯，由天津市津海化工有限公司生产；其他试剂均为分析纯。 　　AR2140型电子分析天平（奥豪斯国际贸易有限公司）；601超级恒温水浴（江苏省金坛市医疗仪器厂）；T6新世纪型分光光度计（普析通用科技有限公司）；TGL-16高速台式冷冻离心机（湖南湘仪离心机厂）；LABOROTA 4000旋转蒸发仪（Heidolph公司）；LGJ-18B型冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂有限公司）。 　　1.2试验方法 　　1.2.1树脂种类参照夏文宽等的研究[3-5]，选择12种树脂：HPD100、HPD400、HPD500、HPD722、HPD826、HPD100B、AB-8、S-8、X-5、D4020、聚酰胺、XDA-7PH型，各树脂型号及物理参数见表1。 　　1.2.2树脂预处理将树脂分别置于95%乙醇溶液中浸泡12 h，用蒸馏水漂洗至无醇味，再依次用1%盐酸、蒸馏水、5% NaOH溶液、蒸馏水洗至中性。 　　1.2.3总黄酮含量测定 　　1.2.3.1标准曲线的绘制参照Li的方法[6]，称取 20.00 mg 芸香苷标准品，加入75%乙醇溶解定容至100 mL容量瓶中，制成浓度为0.20 mg/mL的标准溶液；分别吸取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL标准液置于25 mL比色管中，加5%亚硝酸钠溶液1.0 mL，摇匀，放置5 min，再加10%硝酸铝溶液1.0 mL，摇匀，放置5 min。最后加10%氢氧化钠溶液10.0 mL，摇匀，75%乙醇定容至25 mL刻度放置15 min，以相应试剂为空白，在505 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为y=4.780 7x+0.005 1，r2=0.999 6，在0.02～0.14 mg/mL范围内有良好的线性关系。 　　1.2.3.2样品的测定将金花葵提取物样品置于25 mL比色管中，加5%亚硝酸钠溶液1.0 mL，摇匀，放置5 min，再加10%硝酸铝溶液1.0 mL，摇匀，放置5 min。最后加10%氢氧化钠溶液10.0 mL，摇匀，75%乙醇定容至刻度放置15 min，以相应试剂为空白，在505 nm波长处测定吸光度， 利用回归 　　1.2.5动态吸附和动态解吸试验 　　1.2.5.1动态上样量的确定参考严志慧的方法[5]，将静态试验筛选出的树脂装于层析柱（1.0 cm×30 cm）内，用95%乙醇清洗涤至无白色浑浊，用蒸馏水洗至无醇味，将黄酮粗提液100 mL于柱顶注入，以1 mL/min的流速