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野生大花牵牛变异植株快速繁殖研究 　　摘要：以花期长的野生大花牵牛生长点为试材，进行了生长点的生长和分化、试管苗的生根和生根继代培养、试管苗的移植的研究，建立起野生大花牵牛生长点的快速繁殖技术。结果证明：1/2MS+0.1 mg/L6－BA+0.1mg/LNAA是生长点生长培养的理想培养基；MS+0.5 mg/L6－BA+0.1 mg/L NAA是生长芽分化培养和分化继代的理想培养基；1/2MS+0.1 mg/L IBA是试管苗生根和生根继代培养的理想培养基。试管苗在温室营养钵的河沙中易移栽成活，移植成活的试管苗长势旺盛，并保持了花期长的有利变异性状。 　　关键词：大花牵牛；组织培养；快速繁殖 　　中图分类号：S681.603.53　文献标识号：A　文章编号：1001－4942(2011)02－0024－03 　　 　　大花牵牛又称牵牛、裂叶牵牛、牵牛花等，属于旋花科、牵牛属，为一年生草本植物，生长于荒地、宅旁或篱笆间，在我国的很多地区有分布。大花牵牛的种子可作药用，称为牵牛子，具有利水、泻下、消积、杀虫等功效，能治水肿、腹水、脚气、便秘、阴囊肿胀等疾病。由于抗性强、适应性强、长势旺盛，并且花朵美丽，近年来，有人将野生大花牵牛直接进行人工栽培。但是，野生大花牵牛花期仅有30 d左右，从而影响了观赏性。我们在对野生花卉进行调查时，曾经发现一株花期达70多天的野生变异植株，并收集了种子进行种植，但由于分离作用，实生后代花期长的有利性状丧失。2007年，当我们再次发现这样的野生变异植株时，对其进行了茎尖培养及快速繁殖的研究，以期使野生大花牵牛开花时间长的有利变异植株种质得到保存，并应用于观赏栽培。虽然目前已有牵牛属植物组织培养研究的报道，但迄今尚未见野生牵牛有利变异植株快速繁殖的报道。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　材料的预处理 　　8月中旬，当变异植株的花期即将结束但仍正常生长时，向根部浇灌1/4MS+0.2 mg/L6－BA+0.4 mg/L IAA的促进萌发溶液，同时去掉顶端茎尖以破坏顶端优势。7 d后，待叶腋生长点开始萌动时，将具有生长点的嫩茎采回实验室备用。 　　 　　1.2　材料灭菌 　　参见徐丹丹等(2008)泽泻根茎的研究。 　　 　　1.3　培养条件 　　参见刘玲绯等(2008)长蕊丝石竹的研究。 　　 　　1.4　试验方法 　　1.4.1　不同培养基对生长点生长的影响将具有生长点的无菌茎段剪成长0.4 cm左右、具有1个生长点的茎段后，接种到以MS、1/2MS和White为基本培养基，附加0.1 mg/L 6－BA+0.1mg/L NAA的培养基上，进行生长点的生长培养。每种培养基接种12个茎尖。 　　1.4.2　生长芽的分化培养和分化继代培养　将上述由生长点培养的生长芽从基部切下后，接种到MS+0.5 mg/L6－BA+0.1 mg,/LNAA的培养基上。进行生长芽的分化培养。共接种培养12个生长芽。 　　1.4.3　不同浓度生长素对分化芽生根培养的影响将上述培养的分化芽从基部切下后，接种到以1/2MS为基本培养基，附加不同浓度生长素的培养基上进行分化芽的生根培养。分化芽生根培养试验重复2次，每种培养基接种培养100个分化芽。 　　1.4.4　试管苗的生根继代培养将以上分化芽生根培养的试管苗剪成长1～1.5 cm、至少具有2个生长点的茎段后，接种到以上生根培养基上，进行生根继代培养。生根继代培养试验重复3次，每次重复试验继代培养6代，接种培养200个试管苗茎段。 　　1.4.5　试管苗的移植5月上旬，将继代培养的生根试管苗从培养瓶中取出后，直接移栽到上部为干净河沙、下部为肥沃园土的日光温室营养钵中。移栽试验重复3次，每次移栽400株试管苗。 　　 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　不同基本培养基对生长点生长的影响 　　接种培养40 d时观察结果(表1)表明，在以White为基本培养基的培养基上，培养的生长点未生长。在以MS和1/2MS为基本培养基的培养基上，培养的生长点均可生长。从生长芽的长势看，以1/2MS为基本培养基的培养基上生长芽叶片的生长度、茎粗、高度都好于MS。这说明1/2 MS+0.1 mg/L6－BA+0.1 mg/L NAA的培养基是变异野生大花牵牛生长点生长培养的理想培养基。 　　 　　2.2　生长芽的分化培养和分化继代培养 　　接种培养到50 d时统计结果表明，在以MS为基本培养基的培养基上，1个生长芽平均能分化出3.8个高0.9～1.6 cm、长势较好的分化芽。将培养的分化芽剪成长0.5 cm左右的茎段，并接种到相同的培养基上进行分化继代培养，经过50d，又会培养出一代分化数和长势基本相同的分化芽。相