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野生豆瓣菜嫩茎无性系建立研究 　　摘要：以野生豆瓣菜的嫩茎为外植体，在附加不同浓度的BA、IAA、NAA和2，4-D的MS培养基上进行离体培养。结果表明：诱导豆瓣菜的嫩茎形成愈伤组织的最佳培养基为MS+BA0.5mg/L+2，4-D1.5mg/L；诱导愈伤组织分化的最佳培养基为MS+BA0.5mg/L；分化不定苗生根的理想培养基是1/2MS+IAA0.2mg/L；试管苗移栽和扦插的最佳基质是炉灰渣；地栽试管苗具有较抗寒、抗逆性强的特点。 　　关键词：豆瓣菜；愈伤组织；无性系 　　中图分类号：S647文献标识码：A文章编号：1006―6500(2008)01―0017―04 　　 　　豆瓣菜(NaturtiumofficinaleR.Br.)属于十字花科、豆瓣菜属，多年半水生草本植物。豆瓣菜叶色浓绿，成卵圆形或近圆形，似豆瓣状，故称“豆瓣菜”，又称西洋菜、水田芥等，因其茎叶味清香而略带有辣味，并具有清热解毒、润肺止咳、利尿等疗效，因此成为人们喜食的蔬菜，需求量不断增加。广州、广西等地除了野生外，也作为蔬菜栽培。近年来，辽宁南部地区的菜农从广州引进种子进行栽培，获得了较好的效益。但由于不耐寒、露地栽培不能越冬等问题无法大面积推广。从黑龙江采集的野生豆瓣菜种子，少量种植证明，这种野生豆瓣菜与广州栽培的豆瓣菜相比，具有耐寒和易于栽培等特性。但却不易获得种子。因此，我们以野生豆瓣菜的嫩茎为材料，进行了组织培养研究，以期建立起豆瓣菜的无性系。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1.1　材料 　　将田间生长非常旺盛的豆瓣菜嫩茎采回来后，用自来水振荡洗涤4次，每次持续约1min。接着用0.05％安利洗涤剂振荡洗涤2～3min，再用自来水漂洗至泡沫消失时转移到超净工作台上，加70％酒精灭菌10～20s，迅速倒入无菌水，洗涤3次，再加0.05％HgCl2振荡灭菌1min后，加入等体积无菌水，继续振荡灭菌10min，最后用无菌水振荡洗涤5次，即获得无菌材料。 　　 　　1.2　培养条件 　　以MS或1/2MS为基本培养基，附加不同种类不同浓度不同配比的BA、IAA、NAA和2，4-D。以MS为基本培养基加蔗糖30g/L，以1/2MS为基本培养基加蔗糖15g/L。培养基强度为180g/cm2，pH5.8～6。培养温度15～25℃，光照强度2000～3000lx，光照时间10-12h/d。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　嫩茎愈伤组织诱导培养 　　将无菌嫩茎剪成0.5cm左右的茎段后，接种到以MS为基本培养基，附加不同种类不同浓度植物激素的培养基上，进行愈伤组织诱导培养，60d观察统计结果。由表1可见，在不加生长素和只加BA浓度分别为0.5，1，1.5，2mg/L的培养基上，豆瓣菜的嫩茎不能诱导形成愈伤组织。而在含上述浓度BA培养基上，再分别加入1.5mg/L的NAA或2,4-D，豆瓣菜的嫩茎均能诱导形成愈伤组织，愈伤组织的诱导率为65％～95％。在BA0.5mg/L，2.4-D1.5mg/L的6号培养基上诱导的愈伤组织，不仅颜色鲜绿，而且呈直径为0.1cm左右的颗粒状，经过50d的培养，1个外植体可以形成150～250个浅绿色的愈伤组织颗粒。这样的愈伤组织具有较强分化能力，连续继代18代，所形成的愈伤组织不仅外观上保持不变，而且每代每个愈伤颗粒都可以继代培养形成60～110个基本一致的颗粒。这说明MS+BA0.5mz/L+2,4-D1.5mg/L是诱导豆瓣菜嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基。 　　 　　 　　2.2　愈伤组织的分化培养 　　把在6号培养基上诱导的颗粒状愈伤组织，接种到附加不同浓度BA、IAA和NAA的MS培养基上，进行分化培养。 　　由表2可见，在同时含有生长素NAA或IAA和细胞分裂素BA的培养基上愈伤组织不能分化，而在不含任何激素和只含BA的培养基上，愈伤组织可以分化。在12号培养基上的分化率达100％，而且分化的不定苗长势好。这说明MS+BA0.5mg/L这一培养基是豆瓣菜愈伤组织分化理想培养基。 　　 　　 　　2.3　不定苗的生根及试管苗生根继代培养 　　将在12号培养基上诱导出的高0.5cm以上的不定苗从基部剪下，接种到以MS或1/2MS为基本培养基，附加浓度为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/L的IAA生根培养基中。20d后观察表明，以1/2MS为基本培养基的生根效果好于MS。在1，2MS+IAA0.2mg/L的培养基上平均生根数为9.4条/株，生根率达100％，而且植株生长旺盛，株高为6cm左右；由此说明，I/2MS+IAA0.2mg/L是豆瓣菜生根培养的理想培养基。把生根苗剪成长1～2cm、具有1个生长点和1片正常叶子的茎段(