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食用玫瑰中生物类黄酮纯化工艺研究 　　【摘　要】 本论文将食用玫瑰花中提取出的生物类黄酮进行分离纯化研究，并通过一系列实验，采用DA-201树脂对食用玫瑰黄酮类化合物进行纯化，确定了最佳动态吸附-解吸操作条件，产品食用玫瑰黄酮含量可以提高7倍。为食用玫瑰工业化的生产研究提供理论基础。 　　【关键词】 食用玫瑰 黄酮 提取 纯化 　　前言 　　食用玫瑰中含有丰富的黄酮类化合物，而大部分黄酮化合物具有多种生理活性，对人体具有明显的抗溃疡、抗菌、抗炎、降血脂和镇痛等生理活性作用。其中仅仅抗氧化的生理活性就促使黄酮化合物成为极具开发前景的天然抗氧化剂。 　　本论文以食用玫瑰为研究对象，对食用玫瑰中生物类黄酮的纯化进行初步的研究和评价，希望我们的研究能为进一开发天然高效食品抗氧化剂、食品添加剂、研制功能性食品及开发医药材料提供理论指导。 　　1. 实验材料、主要药品、仪器及实验方法 　　1.1实验材料 　　玫瑰花:本研究所采用的实验材料为新鲜的食用玫瑰花 　　1.2实验主要仪器设备 　　索氏抽提器，电子分析天平，层析柱，紫外可见分光光度计，旋转蒸发仪，高速离心机，真空泵，恒温循环水箱，电热干燥箱，恒温搅拌循环水浴锅，PHS-2S酸度计，酒精度计等。 　　1.3实验主要的试剂 　　芦丁、没食子酸、棚皮素标样(购自成都药品生物制品有限公司)；石油醚（30―60℃）、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇、冰乙酸、BHT（二丁基羟基甲苯）、浓硫酸、浓盐酸、硼酸、柠檬酸、氢氧化钠、氢氧化钙、三氯化铝、亚硝酸钠、硝酸铝、碘化钾、抗坏血酸、酒石酸亚铁、硫代硫酸钠（以上均为分析纯）；D101、DA-201、硅胶； 　　硅藻土：食品级，粒度：120目； 　　1.4食用玫瑰花黄酮提取工艺的研究[1] 　　正交实验 　　对影响黄酮浸出率的乙醇浓度、浸提温度、浸提时间、料液比(m/V)、浸提溶剂pH值进行正交试验，试验的因素水平如表1所示，以黄酮浸出率为指标，优化浸提工艺条件。 　　表1　正交实验因素水平表 　　1.5食用玫瑰黄酮纯化工艺的研究 　　以1000mL己预处理好的树脂填柱，按照优化的纯化工艺进行动态吸附、洗脱，计算动态吸附量与解吸率，测定制品中食用玫瑰黄酮含量。 　　2. 结果分析： 　　2.1食用玫瑰花黄酮提取工艺的研究 　　对正交试验结果直观分析可知，即以料液比为1:20、pH7.80的70%乙醇，80℃浸提120min，此条件下的黄酮浸出率为92.26%，因此以该浸提条件为玫瑰黄酮浸提的最佳条件。 　　2.2黄酮纯化工艺研究[2―9] 　　2.2.1树脂动态吸附实验的优化 　　(1)上柱速度对动态吸附量的影响 　　从图1可以看出,DA-201对玫瑰黄酮的吸附量随料液上柱速度的增加而一直降低,流速大于4BV时,降速趋势。综合考虑，选取1BV的速度上柱较为适合。 　　图1　上柱速度对吸附量的影响 　　图2　料液浓度对吸附量的影响 　　(2)料液浓度对动态吸附量的影响 　　从料液浓度对动态吸附量的影响如图2结果可知，在较低浓度下吸附量与浓度的变化呈正相关。当浓度大于4mg/mL时，树脂动态吸附量有所下降。从实验结果看，料液浓度宜控制在3.5mg/mL。 　　(3)料液pH值对动态吸附量的影响 　　料液pH值对DA-201动态吸附量的影响效果图3所示。实验结果表明，在酸性条件下，树脂对玫瑰黄酮的吸附量随增加而增加，pH为5是达到最大吸附值。随后，树脂吸附量随pH的增加呈下降趋势。因此，选择调节料液pH值为5最佳。 　　图3 料液pH值对吸附量的影响 　　2.2.2动态洗脱条件的优化 　　(1)洗脱液醇浓度的选择 　　从图4可看出，醇浓度对黄酮的洗脱效果有一定的影响。当浓度达到70%时，随醇浓度的增加解吸率变化趋于平衡。减少醇挥发所带来的损失，宜选择70%的乙醇对树脂进行洗脱。 　　(2)洗脱流速的选择 　　如图5洗脱速率与洗脱效果呈一定的负相关性。尽管流速越低树脂解吸率越高，但是2BV的洗脱率兼顾了洗脱效果与实验效率，是较为理想的选择。 　　图4　乙醇浓度对洗脱效果的影响 　　图5　洗脱速率对洗脱效果的影响 　　(3)溶剂用量对洗脱效果的影响 　　图6实验结果表明，4BV的洗脱液即可使解吸率达到97%。再增加洗脱剂，洗脱率增幅不大。因此，采用4BV的洗脱溶剂就能达到令人满意的洗脱效果。 　　图6　洗脱剂用量对洗脱效果的影响 　　图7　洗脱液pH值对洗脱效果的影响 　　(4)洗脱液pH值对洗脱效果的影响 　　洗脱剂pH值对洗脱效果的影响如图7所示。结果表明，碱性洗脱剂的洗脱能力较强，pH达到8.0时最强，继续增大pH值对洗脱效果增效不明显。为保证有效成分不受破