饲料中添加嗜水气单胞菌对日本医蛭生长和成活影响.docVIP

饲料中添加嗜水气单胞菌对日本医蛭生长和成活影响 　　摘 要：在水温21.3～27.5 ℃条件下研究了两种不同基础饲料配比不同浓度的嗜水气单胞菌后，日本医蛭（Hirudo nipponia）增重率、饲料系数和存活率的变化。结果表明，以新鲜猪血为基础饲料配比试验，试验2#、3#组日本医蛭总增重率分别为804.99%±56.16%和682.33%±43.11%，高于其余各组；试验2#组的总饲料系数为2.71±0.32，低于0#、1#组，试验3#组饲料系数最低为2.61±0.19 ；试验2#、3#组日本医蛭存活率分别为93%±4.23和96.00%±0.00%，高于其余各组。以人工配合饲料为基础饲料配比试验，试验1#、2#组日本医蛭总增重率分别为102.33%±12.12% 和114.33%±14.81%，高于其余各组；试验1#、2#组总饲料系数分别为3.57±0.31和3.41±0.25，低于其余各组；试验1#、2#组日本医蛭存活率分别为88.00%±5.64%和87.00%±4.23%，高于其余各组。 　　关键词：日本医蛭（Hirudo nipponia）；嗜水气单胞菌；增重率；饲料系数；存活率 　　日本医蛭（Hirudo nipponia Whitman，1886）属于医蛭科（Hirudinidae Whitman，1886），医蛭属（Hirudo Linnaeus，1758），别名水蛭、稻田医蛭。此种以人、牲畜和蛙的血液为食，在我国分布较广，江苏、山东、湖北、四川、吉林、河南、内蒙古、辽宁等地均有发现[1]。日本医蛭属于吸血类水蛭，其体内含有水蛭素（Hirudin）[2，3]。水蛭素最早是从欧洲医蛭（Hirudo medicinalis）体内发现并分离鉴定的[4，5]，具有抗凝、抗血栓、纤溶性和降血脂等作用。Kim 等[6]报道了水蛭素在预防和治疗心血管病方面的功效。日本医蛭又是一种重要的中药材，我国明朝李时珍的《本草纲目》已有记载，主要用来治疗跌打损伤、女子月闭及产后血晕等症状。 　　近年来，由于日本医蛭的医用价值和经济价值，人类乱捕乱抓现象极其严重，天然种群数量不断减少，为保证其自然资源的稳定性和可持续性，人工养殖势在必行。目前，人工养殖日本医蛭因密度大，导致疾病频发，死亡率高，而日本医蛭中的肠道工程菌具有分解蛋白质和脂肪、吸收血细胞、调节肠道微生物种群、预防疾病等特点[7]。因此，本试验以前期实验为基础，在日本医蛭的饲料中加入不同浓度的肠道工程菌，从而检验肠道工程菌对日本医蛭增重率和成活率的影响，确定肠道工程菌与日本医蛭饲料的最佳配比浓度，为日本医蛭及其他吸血类水蛭的人工养殖及疾病预防提供参考依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　日本医蛭在辽宁省辽中县周边有河沟的地区采集，健康无病，平均每条体质量0.24 g。采集的日本医蛭暂养至580 mm×380 mm×250 mm的60目网箱中，网箱置于同等大小的聚乙烯塑料箱中，并加入曝气24 h以上的自来水，并以此作为日本医蛭的养殖用水，其水温21.3～27.5 ℃，pH 为7.2～7.4 ，溶解氧为6.02～9.13 mg/L，空气湿度为48%～71.5%RH。 　　1.2 肠道工程菌的分离与鉴定 　　随机挑选暂养的日本医蛭，经10 mg/L聚维酮碘消毒5 min，高压灭菌麻醉剂[8]麻醉后，腹部朝上固定到酒精消毒的解剖盘上解剖，解剖后消化道的内容物用无菌生理盐水清洗，再用无菌棉签在肠道内壁擦拭后，涂布到血琼脂培养基[9]上，经37 ℃培养箱培养48 h后，培养出的细菌通过16S rDNA-1500 bp测序快速鉴定菌种，鉴定的菌种为肠道共生菌（图1、图2）。根据前期实验确定的菌种的种群数量选取肠道共生菌中的优势菌种S2作为试验用肠道工程菌，其中菌种S2的DNA序列通过NCBI-Blast比对与嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）相似度达到99.4%，因此确定S2菌种为嗜水气单胞菌。 　　1.3 试验动物分组 　　挑取饥饿健康的日本医蛭进行分箱试验，每箱50尾医蛭，并设有3组平行，其平均体质量≥0.2 g；以医蛭消化道上分离出来的嗜水气单胞菌为菌种来源，通过血平板培养基培养，制得2.4×108 cfu/mL嗜水气单胞菌，再分别以新鲜猪血和人工饲料（见表1）为基础饲料配比不同浓度的嗜水气单胞菌作为本次试验的考察因素（表2），以日本医蛭增重率、饲料系数、存活率做评价指标；并以对照0#组为参照，优选日本医蛭肠道工程菌与食用饲料的最佳配比浓度。 　　1.4 日本医蛭养殖管理 　　日本医蛭养殖采用室内网箱水养法，把日本医蛭放入380 mm×275 mm×140 mm的60目网箱中，网箱置于同等大小的聚乙烯塑料箱中，并加入曝气24