临床免疫常用分析技术简介检验科课件.ppt

临床免疫常用分析技术简介 检验科 抗原抗体反应 基本原理 抗原表位与抗体超变区中抗原结合位点之间的结合 基本条件： 1. 结合力 2. 亲和性 3. 亲水胶体转化为疏水胶体 反应场所 体内：吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等。 体外：凝集反应、沉淀反应、补体参与反应、中和反应等。 抗原 抗体 氢键结合力 O N O N H H 静电引力 - - + + 范得华力 - + + - + - - + 疏水作用力 排斥的水 抗原抗体结合力示意图 亲和性 是抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的引力，这是抗原与抗体之间固有的结合力。 亲水胶体 疏水胶体 转化 NaCl 可见反应 转化 NaCl 疏水胶体 可见反应 亲水胶体 疏水胶体 可见反应 亲水胶体转化为疏水胶体示意图 抗原抗体反应的特点 特异性 按比例 可逆性 特异性 抗体过量 比例合适 抗原的量 抗原过量 抗体沉淀的量 前带 等价带 后带 比例性 混合抗体 混有SPAg 抗体-SPAg 抗体-SPAg 分离剂 一、抗原抗体结合 二、分离抗体 可逆性 抗体 颗粒性抗原-----凝集反应 可溶性抗原-----沉淀反应 补体参与的细菌抗原-----溶菌反应 红细胞抗原-----溶血反应 毒素抗原-----中和反应 标记抗原抗体反应 抗原抗体反应的类型 沉 淀 反 应 沉淀反应 定义：可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。 第一阶段：抗原抗体特异结合 第二阶段：形成可见的沉淀物 抗原抗体结合使反应系统透光度发生改变，可以建立以测定透光度为特征的免疫浊度法。 网格状的抗原抗体复合物结构 凝集反应 定义：颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。 第一阶段：抗原抗体特异结合 第二阶段：可见的颗粒凝集 溶血反应 参与反应的成分： 红细胞：绵羊红细胞（SRBC） 抗红细胞抗体：溶血素（抗SRBC） 补体 直接用途是测定总补体活性或溶血素的效价；也可利用溶血系统作为指示剂，检测另一反应系统的抗原或抗体。 测定总补体活性 “CH50试验” 溶血反应 溶血百分比 补体含量 在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变 。 标记免疫技术 三大经典标记技术 荧光抗体技术——1941 放射免疫分析——1956 酶免疫技术 ——1966 酶免疫技术 酶免疫测定 均相酶免疫测定 非均相酶免疫测定 固相酶免疫测定 （ELISA） 液相酶免疫测定 酶免疫组化 Ab*＋Ag→Ab*Ag＋Ab* 根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相和异相两种类型。 标记的抗体检测抗原 结合的标记物 游离的标记物 酶联免疫吸附剂测定（ELISA） 洗去多余抗原 洗去多余抗体 洗去多余酶标抗体 酶 酶 酶 ELISA的类型——双抗体夹心法（测抗原） ELISA的类型——间接法（测抗体） ELISA的类型——竞争法（测抗原或抗体） ELISA的类型——捕获法（测IgM 抗体） ELISA测定 国标8×12ELISA板 ELISA反应孔 阳性结果 酶免疫测定的应用 高度的敏感性和特异性 最小的达 ng 甚至 pg 水平 标记试剂稳定，无放射性危害 检测项目广泛 谢 谢