第十四章 遗传病的诊断与防治-XYL.ppt

气泡儿童”，X染色体链锁的严重组合型免疫缺陷（x-linked severe combined immunodeficiency?， SCID-X1）的儿童，该病是由X染色体上的一个缺陷基因引起的，只在男童中发病，因为女孩有两条X染色体，另一条染色体上的拷贝可以弥补缺陷。“气泡儿童”无法产生健全的免疫系统，必须在形似气泡的无菌隔离舱中生存。这些儿童都携带一骨髓移植是治疗“气泡儿童”的手段之一，但成功率很低，因此基因疗法作为一种替代手段而被寄予厚望。试验性基因治疗激活了儿童的一个癌基因 * 第二节 遗传病的治疗 化学法 　 应用磷酸钙沉淀法改变细胞膜透性，以加强细胞从培养液中摄取外源DNA。但此法转移效率低，其成功率约在1/100～1/1000。 * 第二节 遗传病的治疗 膜融合法 利用人工脂质体或红细胞影泡、微细胞、原生质球等通过与靶细胞融合或直接注射到病灶区，令其内含的外源基因表达。 * 第二节 遗传病的治疗 受体载体转移法 将含有目的基因的重组质粒和某些细胞表面受体能识别的特异性多肽（配体）形成复合物，通过细胞内吞途径达到转移基因的目的。可使外源基因在活体内导向特异类型的细胞 * * 优点 稳定 可携带大片段外源DNA 可选择特异的靶细胞 无免疫原性 缺点 转染效率较低 瞬时表达 第二节 遗传病的治疗 第二节 遗传病的治疗 同源重组法 将外源性目的基因定位或原位修补，导入的外源基因和染色体上的基因在同源顺序间发生重组而插入染色体，这样外源基因专一地整合到靶细胞的特定位点，取代原位点上的缺陷基因。 * 第二节 遗传病的治疗 病毒介导转移法 以病毒为载体，将外源目的基因通过基因重组技术，组装于病毒上，并使重组病毒感染受体宿主细胞，完成基因转移。 * * 第二节 遗传病的治疗 逆转录病毒(retrovirus) 优点 能高效转染宿主细胞，转染率可达100％ 宿主范围广泛 可转染大量细胞并长期停留，病毒基因和所载的外源基因都能表达 缺点 病毒容量有限(7 kb) 随机插入,使插入位点 附近的基因过度表达 有致癌作用 * 5’ LTR LTR 3’ U3 R U5 U3 R U5 ψ gag pol env 病毒核心 逆转录酶 外壳蛋白 抗原基因 基因 基因 逆转录病毒(retrovirus) 逆转录病毒载体的构建(缺陷型病毒) 5’ LTR LTR 3’ U3 R U5 U3 R U5 ψ 小鼠白血病病毒(Mo-MLV) 外源目的基因 第二节 遗传病的治疗 靶细胞的选择 皮肤成纤维细胞、干细胞、前体细胞都是理想的转基因治疗靶细胞。 原则： 易于取材 易于体外培养 便于进行遗传技术操作 安全回输 * 第二节 遗传病的治疗 反义寡核苷酸技术 * 应用DNA和RNA的碱基互补可形成同源或异源双链的原理，人工合成反义RNA(或DNA)，和mRNA互补，使其灭活，阻止其翻译成蛋白质，达到治疗疾病的目的。 第二节 遗传病的治疗 “自杀基因”疗法 “自杀基因”(suicide gene)的产物可将一种无害的药物(前药物)转化成对正常细胞无害,对肿瘤有害毒性物质,使肿瘤细胞DNA不能复制而死亡. * * “自杀基因”疗法 第二节 遗传病的治疗 ? ? 第二节 遗传病的治疗 ADA缺乏症 腺苷酸脱氨酶（ ADA） 缺乏症为AR致死性疾病，患者由于缺乏ADA，导致脱氨腺苷酸增多，改变甲基化能力，产生毒性效应，使T淋巴细胞受损，导致严重的联合免疫缺陷症，引起反复感染，以致死亡。 世界上第一种用于基于治疗的疾病? * * ADA-Gene + vector （逆转录病毒） 重组分子 导入 细胞生长分裂 10天 Gene表达 回输患儿体内 1~2月治疗一次10个月 患儿体内A