细生实验设计 周柏.doc

霉菌细胞培养与观察 一、实验目的： 1. 培养霉菌； 2. 观察霉菌菌丝细胞结构，细胞核，细胞器； 3. 观察菌丝不同部位霉菌细胞形态。 二、实验材料： 1.试剂：面包，固定液（冰乙酸，甲醇），PBS缓冲液（磷酸二氢钾，氢氧化钠，蒸馏水，PH调至7.2磷酸盐缓冲液，健那绿）蒸馏水, 50%乙醇。 2.器材：载玻片，盖玻片，镊子，培养皿，吸水纸，吸管，光学显微镜 三、原理： 霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，不是分类学的名词，霉菌细胞具1至多个细胞核。细胞壁分为三层：外层无定形的β葡聚糖（87nm)；中层是糖蛋白，蛋白质网中间填充葡聚糖（49nm)；内层是几丁质微纤维，夹杂无定形蛋白质（20nm)。 构成霉菌体的基本单位称为菌丝，呈长管状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝。在固体基质上生长时，部分菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。霉菌繁殖迅速，常造成食品、用具大量霉腐变质，但许多有益种类已被广泛应用，是人类实践活动中最早利用和认识的一类微生物。 霉菌菌丝一般为颜色鲜艳，且菌丝为单层细胞，故可直接用于观察其显色结构、细胞壁，染色后可观察其细胞器。 四、操作步骤： 1. 霉菌的培养： 一般的霉菌，将面包放置在30℃左右，湿度在75%以上，两至三天即可产生黄曲霉菌。 2.制片观察： 在载玻片上加一滴蒸馏水，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的液滴中，用解剖针小心地将菌丝分散开。（注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。）在低倍镜下找到霉菌细胞，移到视野中央，切换至高倍镜观察。 3.观察不同部位细胞： 从霉菌菌落距中心距离不同处取样，同步骤2，观察。 五.预期效果： 两至三天即可产生真菌菌落。显微镜可观察到一个细胞中有2~3个细胞核。