地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构-微生物学报.PDF

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 地中海拟无枝菌酸菌!# 中生物素羧基载体蛋白 结构基因的克隆、表达及转录 卢 捷 姚玉峰 姜卫红 焦瑞身 （中国科学院上海生命科学研究院 植物生理生态研究所 微生物次生代谢分子调控开放实验室 上海 $%%%$ ） 摘 要：乙酰辅酶 羧化酶（ ， ）催化依赖于 的乙酰 D D?+E0( F’D F/-,’G0(/=+ 4F 3 )! ) #)$ DFF DHI 辅酶 羧化形成丙二酸单酰辅酶 ，该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步，也是受到调 D D 控的关键一步。根据结核分枝杆菌（ ）和天蓝色链霉菌（ ）中 ! ) #$%’#()*+* , ) ’)%(+’)() DFF C ! 亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌J$ 对氨基酸密码子的使用偏好，设计简并引 物以J$ 基因组K1D 为模板扩增出一条约$L%, 的片段，并以此片段作探针成功地从J$ 基 因组?’=67M 文库中克隆到相应的DFF C 亚基的编码基因 -’’. 。该基因对应的NO* 长 ! ，编码一个 个氨基酸的蛋白，推算出的分子量是 ， ；基因 含量为 #A2A, L2B 3 A#!K/ P Q F 6’( R ，符合 基因结构特征，距起始密码子 上游 个碱基处有链霉菌典型的 序 A% ) #R J$ PHP 3 OST 列 ，并有生物素羧化酶特征的 结合区。利用 （）系统构建表达载体，在 DPPDPP DHI 4H$B , / ) （ ）中实现了 的诱导表达，产物大部分以可溶形式存在，并通过 ’)(+ SU$# K4 -’’. V+=E+-: S(’E 证明该蛋白上确有共价结合的生物素。1’-E@+-: S(’E 分析了各种氮源对 -’’. 基因转录水平的 不同影响。 关键词：地中海拟无枝菌酸菌，乙酰辅酶D 羧化酶，生物素羧基载体蛋白，转录调节 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） WAB3 D %%%#53$%2 $%% %#5%%L35%2 乙酰辅酶 羧化酶（ ）催化乙酰辅酶 羧化形成丙二酸单酰辅酶 ，该反 D 4F 3 )! ) #)$ D D 应是脂肪酸合成途径的第一步，也是受到关键调控的一步。丙二酸单酰辅酶 不仅是生