重组人胰岛素的体外复性纯化.pdfVIP

第 卷 第 期 北京化工大学学报（自然科学版） ， ３６ １ 犞狅犾．３６ 犖狅．１ 年 （ ） ２００９ 犑狅狌狉狀犪犾狅犳犅犲犻犻狀 犝狀犻狏犲狉狊犻狋狅犳犆犺犲犿犻犮犪犾犜犲犮犺狀狅犾狅 犖犪狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲 ２００９ 犼犵 狔 犵狔  重组人胰岛素的体外复性纯化 陈 阳 陈劲春 （北京化工大学生命科学与技术学院，北京 １０００２９） 摘 要：对大肠杆菌表达的重组人胰岛素原包涵体蛋白的变性复性条件进行了优化。考察了变性液中犇犜犜的浓 度，复性液的 值，还原型谷胱甘肽（ ）与氧化型谷胱甘肽（ ）的物质的量比，甘氨酸（ ）浓度对复性的 犎 犌犛犎 犌犛犛犌 犌犾 狆 狔 影响。结果表明，在变性液中加入 ／ ，复性液 ， 与 物质的量比为 ， 浓度为 ６０犿犿狅犾犔犇犜犜 犎９５犌犛犎 犌犛犛犌 ５∶１犌犾 ５０ 狆 狔 ／条件下复性率最高。复性后的重组人胰岛素原过 柱，经过 胰蛋白酶和羧肽酶 犿犿狅犾犔 犇犈犃犈犛犲犺犪狉狅狊犲犉犉 犜犘犆犓 犅 狆 酶切后，再过犛犲犺犪犱犲狓犌２５柱，得到纯度较高的重组人胰岛素。目的蛋白收率为９６犿／干菌体。 狆 犵犵 关键词：重组人胰岛素原；变性；复性；酶切 中图分类号：犙５７８ ［］ ７ 体，收率明显高于以往的文献报道 。 引 言 胰岛素是治疗糖尿病的重要药物。用于临床己 １ 材料和方法 有 多年，过去医用胰岛素都是从猪和牛的胰腺提 菌种 ８０ １１ 取， 重组技术的出现为胰岛素的生产开创了新 菌株由本实验室构建 犇犖犃 犈犜 （ ）犈．犮狅犾犻犚狅狊犲狋狋犪 狆 ２８＋ 犪 ［］ １ 的途径 。 并保存。 大肠杆菌表达系统在重组人胰岛素的生产中已 １２ 实验试剂及仪器