《第二章_菌种与种子扩大培养》教学课件.pptVIP

(2)培养前期，为了提高酵母增殖速率，缩短培养时间，实验室扩大培养阶段，采用酵母最适繁殖温度25℃。而后每扩大一次，温度均相应有所降低，使酵母逐步适应低温发酵的要求。但每次降温幅度不能太大，以防酵母活性受到抑制。随着培养温度的降低，培养时间视稀释倍数而相应延长。 (3)为了缩短酵母生长停滞期和缩短培养时间，每阶段扩大培养的酵母，最好在酵母对数生长期移植，具体地说，就是在酵母增殖率开始回降以前移植。此时的酵母出芽率 最高，死亡率最低，移植后，迅速增殖。 (4)酵母增殖是依靠糖的生物氧化，即呼吸作用而获取能量的。因此，在酵母扩大培养时，通风供氧是绝对必要的，从三角瓶到卡氏罐培养阶段，一般是依靠定时摇动容器(或使用振荡器)，使酵母液与空气接触，容器上部空间的空气也使酵母与氧有接触的机会。移植到生产现场扩大培养后，即需注意通风供氧。 (5)培养酵母，应使用营养丰富的优质培养基。实验室培养阶段应选择α一氨基氮含量高的优级麦芽，不加辅料，自制培养基。 (6) 关于扩大倍数问题，实验室阶段，由于培养温度高，增殖时间短，无菌操作条件较好，扩大倍数可以较高，例如1：10一20，甚至更高一些。汉生罐以后的扩大培养，由于温度逐步降低，酵母倍增时间延长，为了很快地使酵母起发，保持酵母的生长优势，增强其抗污染能力，扩大倍数以1：5左右为宜。根据这一原则，中间扩培罐的数量和容积也就容易确定了。 (7) 关于通风问题，培养初期，培养液中葡萄糖含量高，受克拉勃垂效应(Crabtree effect)的影响，连续通风，酵母的增殖效果未必如理想的那么好，以间歇通风为宜。总之，通风宜足，但不必过多。传统的做法，上面酵母多采用连续通风，而下面酵母则不采用连续通风，这可能与两者的发酵温度不同(9℃与20℃)和发酵时间不同（3天与10天有关） (8)关于扩大培养麦汁的无菌问题。生产现场扩大培养一般都采用糖化车间来的冷麦汁，往往由于输送距离较远，还需另外加热灭菌。 思考题 一、名词解释 菌种衰退、菌种复壮、种子培养级数、种龄、接种量 二、问答题 1、简述产淀粉酶菌株的筛选过程。 2、简述菌种可能的退化原因。 3、菌种保藏的原理是什么？ 4、菌种保藏的方法有哪些？并例举其中一种保藏方法详细阐述其操作过程。 5、什么是种子的扩大培养？为什么要对种子进行扩大培养？ 6、 谢谢！ （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 如何保持菌种优良性状的稳定是研究菌种保藏的重要课题。 所以菌种保臧是进行微生物学研究和微生物有种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平，缺氧状态，干燥和低温，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力。 一种好的保藏方法，首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变。 砂土管保藏法：细菌，霉菌，防线菌 硅胶保藏法：细菌 冷冻干燥法：细菌，防线菌 液氮超低温冻结法：细菌，真菌 所以，育种工作者要充分掌握微生物学、生物化学、遗传学的基本原理和国内外有关的先进科学技术，灵活而巧妙地将其运用到育种中去，使菌种选育技术不断更新和发展。 目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快慢；产孢子能力的大小；及对营养、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此，种子扩大培养应根据