利用酵母双杂交系统筛选猪Calsarcin-1基因相互作用-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2009,42(2):663-668 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.02.035 利用酵母双杂交系统筛选猪 Calsarcin-1 基因相互作用蛋白 1,2 1,2 2 1 1 1 1 1 1 杨 锷 ，朱文娟 ，伍晓雄 ,杨述林 ，李 奎 ，牟玉莲 ，崔文涛 ，储明星 ，马月辉 1 （中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/ 中国农业科学院家养动物遗传资源与种质创新重点开放实验室，北京 100193 ； 2 华中农业大学动物医学院，武汉 430070 ） 摘要：【目的】利用酵母双杂交系统研究与猪Calsarcin-1 相互作用的蛋白,了解 Calsarcin-1 在猪骨骼肌纤 维类型形成和信号通路的调控功能。【方法】首先用长白猪Calsarcin-1 基因构建既无自激活性又无毒性的 pGBKT7-CS1 诱饵载体；然后从猪的骨骼肌组织样中提取 mRNA，利用 SMART 技术合成并纯化双链 cDNA；最后通过 酵母双杂交系统的共转化法筛选与 Calsarcin-1 相互作用的蛋白，在 GenBank 中比对分析相互作用基因，分析 Calsarcin-1 在骨骼肌中的功能。【结果】构建了pGBKT7-CS1 诱饵载体，获得具有完整3′端的猪骨骼肌单链cDNA， 并合成双链cDNA。筛选出4个与 Calsarcin-1 相互作用的蛋白，经与人的基因比较分析，发现 Calsarcin-1 与α -1肌动蛋白和α-3辅肌动蛋白互作，与骨骼肌Z线附近结构形成有关；与肌集钙蛋白-1和肌钙蛋白T3互作，影 响钙离子的调控。【结论】分析所筛选出的蛋白功能，推测Calsarcin-1 通过结合这些蛋白，维持细胞结构的稳定， 影响相关蛋白的钙离子结合能力，从而参与钙离子调控；而钙离子浓度的变化将影响到其它控制肌纤维分化的因 子，或其它调控通路，共同调节快慢肌纤维的形成与转化。 关键词：猪；骨骼肌；Calsarcin-1 基因；酵母双杂交 Screening for Porcine Calsarcin-1 Interacting Proteins by Yeast Two-Hybrid System 1,2 1,2 2 1 1 1 1 YANG E , ZHU Wen-juan , WU Xiao-xiong , YANG Shu-lin , LI Kui , MU Yu-lian , CUI Wen-tao , 1 1 CHU Ming-xing , MA Yue-hui 1 ( Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences/The Key Laboratory of Domestic Animal Genetic Resources and Germplasm Innovation, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193; 2C