前言本标准附录A为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理.DOCVIP

SN/T ××××—×××× PAGE PAGE 1 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布200×-××-××实施200× 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 200×-××-××实施 200×-××-××发布 进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法 Determination of Sialinic acid in cubilose and its products for import and export （征求意见稿） SN/T ××××—×××× SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ICS PAGE 4 前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：黄华军、李敏、奚星林、林峰、陈文锐、陈秀明、潘丙珍、庞世琦、李杏。 进出口燕窝及其制品中唾液酸含量的检测方法 1 范围 本标准规定了进出口燕窝及其制品中唾液酸检测的分光光度法和液相色谱—质谱/质谱确证方法。 本标准适用于进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定和确证。 2 方法提要 用醋酸将燕窝中的糖蛋白水解为唾液酸，释放出的唾液酸与酸性茚三酮形成稳定的黄色溶液，用分光光度法定量测定。以液相色谱—质谱/质谱确证。 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 冰醋酸。 50％醋酸溶液: 分别量取50 mL冰醋酸和50mL水,混匀备用。 盐酸。 硫酸铵。 茚三酮。 茚三酮指示剂:往2.5 g茚三酮中加入60 mL冰醋酸和40mL盐酸，搅拌溶解 透析袋:能透过分子量为10000的物质。 唾液酸标准物质（N-Acetylneuraminic acid, CAS编号131-48-6），纯度≥ 99%，在—18℃ 唾液酸标准溶液（200μg/mL）：准确称取唾液酸标准物质，用水配成浓度为200μg/mL的唾液酸标准溶液。该溶液在4℃ 沸石。 甲醇（色谱纯）。 4 仪器和设备 4.1 分光光度计。 4.2 液相色谱—质谱/质谱联用仪:配有电喷雾离子源。 4. 3 烘箱。 4.4 研钵。 4.5 筛网：100目筛。 4.6 电子天平：感量为0.1 mg和0.01 g。 4.7 具塞三角瓶：100mL。 4.8 加热设备。 4.9 离心管。 4.10 离心机：3000 r/min。 4.11 比色管：10mL。 4.12 比色皿：1cm。 4.13 容量瓶：100mL。 5 样品制备 5.1 固体燕窝的制备 取燕窝样品在105℃烘箱中烘干，冷却后研磨，过100目筛后 5.2 燕窝制品的制备 液体状态的燕窝制品,用打浆机制样,静置等待泡沫与样液分层后, 滗去泡沫(或采用离心手段实现分层)。取适量该样液装入透析袋中，在自流水中透析24小时，透析后的样液装入洁净容器。 6 测定步骤 6.1 唾液酸提取 6.1.1 固体燕窝的唾液酸 称取0.1g（精确到0.0001g）样品粉末(5.1)到具塞三角瓶中，加入50％醋酸溶液(3.2)20 mL，加沸石几颗，加热回流10分钟，冷却后，转移到100mL容量瓶，并用水定容。摇匀后倒出10mL到加有1.2g 硫酸铵的离心管中，用玻棒搅匀，使硫酸铵溶解，3000 rpm离心10min，上清液备用。 6.1.2 液态燕窝制品的唾液酸提取 称取10 g （精确到0.0001g）样液(5.2)到具塞三角瓶中，加入冰醋酸10 mL，加沸石几颗，加热回流10分钟，冷却后，转移到100mL容量瓶，并用水定容。摇匀后倒出10mL 到加有1.2g 硫酸铵的离心管中，用玻棒搅匀，使硫酸铵溶解，3000 rpm离心10min，上清液备用。 如果燕窝制品很浓稠，在加热水解时容易焦糊，则需减少称样量到5g（精确到0.0001g），加入50％醋酸溶液15 mL 6.2 唾液酸含量的测定 6.2 取上清液（6.1）2mL于10mL比色管中，再加入茚三酮指示剂(3.6)2mL 与冰醋酸2mL，摇匀，在100℃水浴中显色10min，取出试管在流动水中迅速冷却，然后用1cm比色皿，在470nm波长处测定吸光度。如果吸光度超出分光光度计的测试范围，需要稀释水解上清液（6.1）。 空白试验：以蒸馏水代替试样，按上述测定步骤进行。 标准曲线： 将唾液酸标准溶液—200μg/mL（3.9）逐级稀释到100μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL。分别取各标准稀释液2mL，加入茚三酮指示剂(3.6)2mL与冰醋酸2mL，摇匀，在100℃水浴中显色10min，取出试管在流动水中迅速冷却，然后用1cm比色皿，在470nm波长处测定吸光度。根据标准品溶液浓度和吸