胆碱酯酶测定操作步骤.PPT

严钰锋 有机磷中毒症状机制药物治疗 【实验目的和原理】 ：中毒、解救 敌百虫（有机磷） ? 家兔 AchE（胆碱酯酶） Ach 胆碱+乙酸 中 毒 Ach 阿托品 解磷定 解 救 Ach 增多 M（虹膜、腺体、平滑肌） N （骨骼肌震颤，抽搐） CNS （先兴奋后抑制） 阿托品：M受体（-） 不能解决N的问题 解磷定：更加牢固的结合毒物 AchE复活 不能解决M的问题 【实验步骤】 称重、固定、取（血1） 中毒、观察、取（血2） 阿托品、观察 解磷定、观察、取（血3） 1 2 3 4 测酶 5 【观 察】 瞳孔大小 （量直径） 唾液分泌 （吸水纸、吞咽动作频率） 大小便 肌震颤 （最好） 【取 血】 耳缘静脉取血10 ul （0.01ml） 迅速吹入含 0.99 ml NS 的试管，充分混匀 ①、②、③的血样按AchE测定操作步骤进行，作好标记，测定各管血样的胆碱酯酶活性 【药物给药剂量及浓度 】 5%敌百虫 1.5ml/kg 0.05%阿托品 2ml/kg 2.5%解磷定 2ml/kg 【注意事项】 建立静脉通道，NS推净药物 注射敌百虫前，先把解救药抽好 先给阿托品，再给解磷定 0.99ml NS 小试管提前备好 1 2 3 4 移液器要正确使用 5 【测酶原理】 活力单位：1ml全血，37oC，6min，水解1umol基质 AchE Ach 胆碱＋乙酸 ＋巯基显色剂 TNB（黄色） 测定管 测定空白管 标准管 标准空白管 1：99全血稀释液（ml） 0.1 试剂一：1umol/ml标准应用液（ml） 0.1 双蒸水（ml） 0.1 试剂二：底物缓冲液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 试剂三：显色应用液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，37℃准确反应6分钟 试剂四：抑制剂（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03 试剂五：透明剂（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 试剂六：稳定剂（ml） 0.05 0.05 0.05 0.05 1：99全血稀释液（ml） 0.1 混匀，室温放置15分钟，412nm，0.5cm 光径，蒸馏水调零比色 【胆碱酯酶测定操作步骤】 一共8管 正 常： 测定管，测定空白管 敌百虫： 测定管，测定空白管 解磷定： 测定管，测定空白管 标准管 标准空白管 【测定下列各管的OD值】 药物 瞳孔 唾液 大小便 肌震颤 血液CHE活力单位 左 右 用药前 敌百虫 阿托品 解磷定 【实验结果】 1.准备：0.99mlNS 试管＊８，抽一管NS备用 2.抓取、称重、观察、固定、建立静脉通路， 取血1稀释、抽三种药 3.注射5%敌百虫1.5ml，观察，记录开始时间 4.肌肉震颤开始后，记录起效时间，取血2稀释 注射0.05%阿托品2ml/kg，观察，记录起效时间 5.注射2.5%解磷定2ml/kg，观察，记录起效时间 取血3稀释 6.得到3管血的稀释液，测酶 【实验流程】