补骨脂抗氧化抑制α―葡萄糖苷酶与抗菌活性成分研究.docVIP

补骨脂抗氧化抑制α―葡萄糖苷酶与抗菌活性成分研究 　　[摘要]从补骨脂中分离得到12个化合物，分别为异补骨脂素（1），补骨脂素（2），8-甲氧基补骨脂素（3），补骨脂定（4），补骨脂宁（5），补骨脂甲素（6），大豆苷元（7），补骨脂乙素（8），补骨脂二氢黄酮甲醚（9），新补骨脂素异黄酮（10），大豆苷（11）和紫云英苷（12）。采用体外清除DPPH和ABTS自由基以及α-葡萄糖苷酶抑制活性对化合物1～4，6，7，11，12抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性进行筛选，利用K-B法筛选化合物5，8～10的抗菌活性。结果显示，补骨脂定具有清除DPPH自由基的能力（IC50 43.85 mg?L-1）；补骨脂定，补骨脂甲素，大豆苷，大豆苷元和紫云英苷具有清除ABTS自由基的能力 （IC50分别为1.32，4.97，10.47，34.22，31.27 mg?L-1）；补骨脂定，补骨脂甲素和大豆苷元显示出强的α-葡萄糖苷酶抑制活性 （IC50分别为40.74，45.73，49.44 mg?L-1）；补骨脂乙素和新补骨脂异黄酮均有明显的抑制SA，MRSA，ESBLs-SA的作用 （MIC分别为0.781 3，1.562 5，0.781 25 μg?disc-1和6.25，6.25，6.25 μg?disc-1）。 　　[关键词]补骨脂；活性成分；抗氧化；α-葡萄糖苷酶； 抗菌 　　补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia Linn.的果实，又名破故纸、黑故子等，为传统中药，具有温肾助阳、固精缩尿、温脾止泻、纳气平喘之功效，临床应用广泛[1]。现代研究证明，补骨脂含有香豆素类、黄酮类、单萜酚类等多种化合物[2-3]，具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种功效[4-5]。郭江宁等[6-7]采用脂类氧化稳定性快速自动测定仪（OSI） 测定了补骨脂及补骨脂石油醚和氯仿部位具有强的抗猪油自动氧化的能力，并从石油醚部位分离得到的补骨脂酚和从氯仿部位分离得到的补骨脂甲素、补骨脂宁和补骨脂定均具有强的抗猪油自动氧化的能力，而该部位分离的补骨脂素和异补骨脂素无此活性。朱兆荣等[8]发现补骨脂总黄酮可提高SOD 的活力，并对免疫器官有一定的影响。常艳旭等[9]采用高效液相-二极管阵列检测器-1，1-二苯基-2-苦基肼在线检测的方法发现补骨脂酚为其主要抗氧化活性成分。Yin S等[10]发现补骨脂中的补骨脂二氢黄酮甲醚有较强的抗金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌作用；新补骨脂异黄酮能抑制新型隐球菌、烟曲霉和金葡菌。本文对补骨脂中分离得到化合物的抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制活性及抑菌活性进行研究，研究结果具有一定创新性，对补骨脂进一步开发提供科学依据。 　　1 材料 　　MultiskanMK3 酶标仪（美国Thermo Electron公司）；LRH-150恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；DELTA 320型pH计（美国Mettler-Toledo公司）；AL104型电子天平（美国Mettler-Toledo公司）；LDZX-30KB立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；JJ-CJ-2FD洁净工作台（吴江市净化设备总厂）；ZWX-201A紫外线空气消毒器；旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；96微孔板；各种移液器及枪头；Bruker Avance-400M核磁共振谱仪；Agilent 6890-5975 GC-MS联用仪；LC3000型高效液相色谱仪；柱色谱为青岛海洋化工生产的填料为硅胶200～300目及硅胶H；薄层色谱为青岛海洋化工生产生产的GF254 硅胶板；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）。 　　二苯代苦味酰基自由基（DPPH，日本东京化成工业株式会社）；[ 2，2′-联氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS，美国 Fluka 公司）；没食子酸丙酯（PG，A019043001，比利时Acros organics公司）；丁基羟基茴香醚（BHA，A019438801，比利时Acros organics公司）；二丁基羟基甲苯（BHT，A020158601，比利时Acros organics公司）；α-葡萄糖苷酶（Sigma公司，批号129K1426）；对-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG，Sigma公司，批号026K1516）；阿卡波糖（Acarbose，Serva公司，批号100434）；小檗碱（自制，纯度98%）；培养基 Nutrient Agar（北京奥博星生物技术有限公司），Broth Medium（北京奥博星生物技术有限公司）。 　　金黄色葡萄球菌（Staphlococcus aureus，SA），耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（Methcillin-resist