堆肥中新菌的分离鉴定及其铬还原特性研究-食品工程专业论文.docxVIP

上海海洋大学 硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 王恒樑 军事医学研究所 教授 主席 王永杰 上海海洋大学 教授 委员 孙晓红 上海海洋大学 教授 委员 阎俊 上海海洋大学 助教 秘书 答辩地点 图书馆 608 答辩日期 2015.06.09 堆肥中新菌的分离鉴定及其铬还原特性研究 摘 要 微生物是地球上分布最为广泛的生命形式，其物种多样性非常丰富。据估计， 目前人类发现的微生物物种仅占微生物物种总数的 10%左右，大量的微生物物种 还没有被发现。微生物广泛存在于人类的生活环境中，通过发现微生物新物种及 其功能，为人类探究大自然奥秘和利用微生物造福人类提供更多的机会。铬作为 工业生产中广泛应用的一种重金属，其六价离子对细胞具有很高的毒性。传统治 理铬污染的方式成本高、效果差，而微生物法治理铬污染作为一种新兴的方法， 克服了上述缺点，提供了新的解决办法。目前人类已经发现了一些具有铬还原功 能的微生物，但是大量尚未被发现的微生物物种资源吸引着人类去进行更多更深 入的研究。 本研究从两个不同采样来源的堆肥土壤中分离出两个疑似新菌，运用多相分 类学方法，对菌株进行了系统鉴定，并对得到的新菌 GSS04T 进行了铬还原特性 的研究。主要结论如下： （1）从大宝山矿区堆肥中分离得到了菌株 GSS04T。GSS04T 能形成直径为 1-2 mm 的浅黄色、圆形、表面光滑、微微向上隆起的不透明菌落。GSS04T 为兼 性厌氧的革兰氏阳性菌，在无氧条件下生长相对缓慢。菌体细胞宽度为 0.8μ m， 长度为 2.6-3.0μ m，有鞭毛，能产生椭圆的内生孢子。在 LB 液体培养基中，GSS04T 的生长温度范围为 15-50℃，最适生长温度为 30-37℃；生长 pH 范围为 5.5-10.0， 最适生长 pH 为 7.0；可以在 0-3%NaCl 浓度范围内生长，在 1.0%的盐浓度下生 长最好。GSS04T 的呼吸醌主要为甲基萘醌 7（MK-7），主要脂肪酸为 C15:（0 42.9%） 和 anteiso-C15:0（24.1%）。GSS04T 主要极性脂包括双磷脂酰甘油(DPG)、磷脂酰 甲基乙醇胺(PME)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)以及三种未识别出的磷 脂和两种未知脂质。GSS04T 的 DNA G+C 含量为 41.1 mol%。GSS04T 在进化树 中的位置支持其属于芽孢杆菌属的结论。在形态特征、生理生化特征和分子生物 I 学特征数据的基础上，GSS04T 被认定为芽孢杆菌属的一个新种，命名为 Bacillus dabaoshanensis。典型菌株 GSS04T 保藏于中国典型培养物保藏中心（保藏号为 CCTCC AB 2013260T）和韩国典型培养物保藏中心（保藏号为 KCTC 33191T）。 （2）从广东省东莞市堆肥中分离得到了菌株 GSS05T。GSS05T 能形成直径 为 0.5-1 mm 的浅黄色、圆形、表面光滑、无隆起的不透明菌落。GSS05T 为革兰 氏阳性菌，菌体细胞宽度为 0.3-0.8μ m，长度为 1.1-2.6μ m，具有运动性，有周 生鞭毛，能产生椭圆的内生孢子。在 LB 液体培养基中，GSS05T 生长温度为 15-50℃，最适生长温度为 30-37℃，该菌能够在 5.5-10.0 的 pH 条件下生长， pH=7.5 为其最佳生长 Ph，可以在 0-3%NaCl 浓度范围内生长，在 1.0%的盐浓度 下生长最好。生理鉴定结果表明，GSS05T 氧化酶实验呈现阳性，过氧化氢酶实 验为阴性。该菌可以将酪蛋白进行水解，可以产生 D-岩藻糖和糖原。GSS05T 的 细胞壁肽聚糖类型为 A4β ，呼吸醌主要类型为甲基萘醌 7（MK-7），这些结果 与其模式菌的主要呼吸醌相同，并且符合鸟氨酸芽孢杆菌属的特征，从另一个方 面证明 GSS05T 属于鸟氨酸芽孢杆菌属。GSS05T 的主要脂肪酸为 C15:0（38.1%） 和 anteiso-C15:0（31.1%）。其在进化树中的位置支持将 GSS05T 归为鸟氨酸芽孢杆 菌属的结论。通过 GSS05T 与其模式菌的生理生化特征进行对比，可以将 GSS05T 与其他同属菌株分别开来。在形态特征、生理生化特征和分子生物学特征数据的 基础上，GSS05T 被认定为鸟氨酸芽孢杆菌属的一个新种，命名为 Ornithinibacillus composti。典型菌株 GSS05T 保藏在位于武汉的中国典型培养物保藏中心（保藏 号为 CCTCC AB 2013261T）和位于韩国的韩国典型培养物保藏中心（保藏号为 KCTC 33192T）。 （3）GSS04T 在有氧和厌氧条件下，均具有还原六价铬离子的能力，而 GSS05T