冻融人卵巢组织体外培养和移植的实验研究妇产科学专业论文.docxVIP

中英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 bFGF Basic fibroblast growth factor 成纤维生长因子 DMEM Dulbeccos Modified Eagle Media DMEM 培养基 DMEM/F12 Dulbeccos Modified Eagle Media: Nutrient Mixture F-12  DMEM/F12培养基 DMSO Dmethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 EPO Erythropoietin 促红细胞生成素 FSH Follicle-stimulating hormone 卵泡刺激素 GFR The grow follicle rate 卵泡生长率 HE Haematoxylin and eosin 苏木紫-伊红 HMG Human menopausal gonadotrophin 尿促性腺激素 HSA Human serum albumin 人血清白蛋白 ITS Insulin-Transferrin-Selenium 胰岛素转铁蛋白硒 P13K Phophatidylinsotitol-3-kinase 磷脂酰肌醇3_激酶 PBS Phosphoric buffer solution 磷酸缓冲液 PCNA Proliferating Cell Nuclear Antigen 增殖细胞核抗原 PROH 1,2-propanediol 丙二醇 PTEN RT-PCR  Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten Reverse transcription polymerase chain reaction 人第 10 号 染 色 体 缺 失 的 磷酸酶及张力蛋白同 源 的基因 逆转录聚合酶链反应 TFSR Total follicle surviving rate 总体卵泡存活率 VEGF Vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 冻融人卵巢组织体外培养和移植的实验研究 中 文 摘 要 目的 1.通过比较不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响，以期寻 求更好的培养方法。2.探讨冻融人卵巢组织异种移植后组织存活及卵泡生长发育的 情况，寻求能够减少移植物缺血损伤的方法。 方法 2012 年 1～4 月取 15 例安徽医科大学第一附属医院妇产科卵巢成熟性畸胎瘤 患者的卵巢组织，采用玻璃化冷冻技术保存，复苏后用不同的组织培养方法进行 体外培养，根据培养方法的不同将培养分 3 组：冻融的人卵巢组织单独培养组（A 组）；冻融的人卵巢组织与人早孕蜕膜单层细胞共培养组（B 组）；Matrigel 培养基 培养的冻融的人卵巢组织组（C 组）。培养 14d 后，各培养组取部分组织固定并检 测各组卵巢组织中总体卵泡存活率(TFSR)及生长卵泡率(GFR)，B 组和 C 组取另部分 组织移植到裸鼠皮下。根据移植卵巢组织的不同将移植组分为 3 组（每组裸鼠 4 只，移植卵巢组织 8 块）：冻融人卵巢组织直接移植（O 组）作为对照组；冻融人 卵巢组织与人早孕蜕膜单层细胞共培养后移植（B1 组）；冻融人卵巢组织与 Matrige 培养基培养后移植（C1 组）。移植术后 1 个月取出的移植物，行组织学检查。 结果 1.与 B、C 组比较，A 组 TFSR 和 GFR 均降低，差异有统计学意义（P 0.05）； B 组和 C 组比较 TFSR 和 GFR 无明显变化，差异无统计学意义。2.与 O 组相比 B1、 C1 组移植卵巢组织回收率和存活率无明显变化，差异均无统计学意义(P 0．05)， 且回收卵巢组织内卵泡 GFR 无明显变化，差异均无统计学意义(P 0．05)；B1 和 C1 组比较移植卵巢组织回收率、存活率及组织内卵泡 GFR 无明显变化，差异均无 统计学意义(P 0．05)。 结论 1.冻融卵巢组织中的原始卵泡在不同体外培养体系中有不同程度的生长；冻 融卵巢组织与人早孕蜕膜细胞共培养或 Matrigel 培养基培养相对于单独培养更有 利于卵泡存活和生长， 但这两种培养方法之间没有明显差别，因而我们可以考虑 应用人早孕蜕膜单层细胞替代 Matrige 做培养基达到避免动物源性污染的目的，但 广泛应用仍需要大样本的实验研究。2.导致各组移植结局均不好的原因可能有：1） 取材不佳，畸胎瘤患者的卵巢皮质内卵泡密度毕竟低于正常卵巢皮质内卵泡密度； 2）对卵巢组织活力评估方法有限，被检测卵巢组织切片并不能完全代表移植的组 织情况；3）移植位置不佳，尽管裸鼠皮下可以为