中国科学院青岛生物能源与过程研究所博士后研究工作报告新型糖苷.PDF

分类号 密级 U D C 编号 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 博 士 后 研 究 工 作 报 告 新型糖苷水解酶的结构和功能研究 东 升 工作完成日期 2014 年7 月—2016 年7 月 报告提交日期 2016 年8 月 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 （山东） 2016 年8 月 新型糖苷水解酶的结构和功能研究 STRUCTURE AND FUNCTION STUDY OF NOVEL GLYCOSIDE HYDROLASES 博 士 后 姓 名 东升 流动站（一级学科）名称 中国科学院青岛生物能源 与过程研究所 专 业（二级学科）名称 生物学 研究工作起始时间 2014 年7 月17 日 研究工作期满时间 2016 年7 月16 日 中国科学院青岛生物能源与过程研究所人事部（山东） 2016 年8 月 内 容 摘 要 发展可再生能源是当前人类社会缓解能源危机，减少温室气体排放的重要应 对策略之一。木质纤维素是一种重要的可再生资源，但是其存在一些固有的抗降 解屏障，使其低成本的大规模应用目前还很难实现。木质纤维素等多糖类生物质 资源的利用离不开糖苷水解酶的作用。糖苷水解酶是一类可以降解糖苷键的酶类, 随着糖类生物学地位的日渐突出，糖苷水解酶的发现与研究也越发重要。为了阐 明新型的糖苷水解酶的作用机理，本论文利用蛋白质晶体学的相关技术，对它们 进行结构功能的研究。 （1）微拟球藻胞内糖苷水解酶的结构功能研究 微拟球藻是一种重要的产油微藻，作为微藻产油研究的模式藻株，研究者已 经对其开展了大量的研究。此前的研究报道认为，微拟球藻胞内的物质存在转化 通路，特别是多糖类物质可以转化为油脂储存。该过程中糖苷水解酶起着至关重 要的作用。本论文选择了微拟球藻胞内转录水平最高的一种糖苷水解酶g6403 进 行了相关研究。生物信息学分析表明该酶是GH1 家族的β-葡萄糖苷酶，该酶是 定位于微拟球藻线粒体上的，与其物质能量代谢密切相关。通过蛋白质晶体学技 术解析了 g6403 的蛋白结构，它有典型的糖苷水解酶的(β/α)8 结构。其底物结合 口袋与之前研究过的酶有一定的差异，可能与其独特的底物降解偏好性相适应。 进一步对其酶学性质的研究表明其最适的酶活作用条件是与其细胞定位高度适 应的。 （2 ）地衣聚糖酶F32EG5 与底物复合物的结构研究 F32EG5 是首次报道的GH5 家族的地衣聚糖酶。为了揭示其独特的底物识别 和催化机理，本研究论文解析了其无活性突变体E188Q 和纤维四糖底物G4 的复 合物的晶体结构。结果表明，底物G4 结合在酶的-3 到+1 位。F32EG5 在-1 和-2 位对G4 底物有严格的识别作用，在-3 位和+1 位的结合比较弱。在-1 位的糖环呈 现出扭曲的船式构象，糖链发生了较大角度的扭曲，这可能是其对 β-1，3 降解 偏好性的重要原因之一。 I （3 ）哈氏噬纤维菌纤维素内切酶CHU2103 的结构研究 哈氏噬纤维菌可以实现对纤维素的高效降解，但是其纤维素降解机制既不同 于厌氧菌的纤维小体机制，也不同于真菌的游离酶系，并且其编码的纤维素酶缺 乏CBM 结构域，这都预示着其有独特的纤维素降解机制。CHU2103 是哈氏菌编 码的一种进行性内切酶，本研究通过解析其晶体结构，发现它有一个很浅的底物 结合裂隙，且其中的芳香族氨基酸的数目特别多，这可能是