寻常性银屑病患者外周血与皮损中Thl7细胞表达及相关性研究.docVIP

寻常性银屑病患者外周血与皮损中Thl7细胞表达及相关性研究 　　[摘要] 目的 探讨寻常性银屑病患者外周血和皮损中Th17细胞及相关因子IL-17、IL-22表达水平与疾病严重程度的相关性。方法 抽取寻常性银屑病患者和正常人外周血，用流式细胞仪检测外周血Thl7细胞，ELISA试剂盒检测血清中IL-17、IL-22表达。取寻常性银屑病患者皮损和正常人对照者皮肤，用量子点免疫荧光双标法检测Thl7细胞表达。 结果 两组患者外周血中CD4及IL-17抗体阳性表达率相比差异有统计学意义（P0.05）；实验组患者外周血IL-17 和IL-23表达水平明显高于对照组（P0.05），并与PASI呈正相关（r=0.501，P0.05）；寻常性银屑病患者皮损和正常人对照者皮肤组织中Th17细胞表达比例差异有统计学意义（P0.05）。结论 Th细胞比例在寻常型银屑病患者外周血和皮损中明显增加，IL-17和IL-22的水平均升高。 　　[关键词] 寻常型银屑病；Th17细胞；CD4 IL-17；IL-22 　　[中图分类号] R758.63 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2013）08（c）-0001-02 　　寻常性银屑病俗称牛皮癣，是一种常见的具有特征性皮损的慢性易于复发的皮肤病。该病顽固难治，是当今世界皮肤科领域的重要研究课题，是全世界皮肤科重点防治疾病之一。目前Th17细胞在银屑病发病过程中的作用越来越引起人们的重视，研究认为Th17细胞及相关因子IL-17、IL-22表达与寻常性银屑病患者疾病严重程度相关[1]。该研究旨在探讨寻常性银屑病患者外周血和皮损中Th17细胞及相关因子IL-17、IL-22表达，选取2012年1月―2012年12月该院收治的127例银屑病患者分成两组，门诊就医确诊的银屑病患者78例为实验组，另选取门诊和住院外科手术患者48例无银屑病等免疫相关性疾病为对照组，分析其与疾病严重程度的相关性。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　实验组：参照1991年10月中国中西医结合学会皮肤性病学会颁布的寻常性银屑病诊断标准，遴选病例。对照组：所选病例近1个月未作局部治疗，2个月内未作任何免疫抑制剂治疗，无其他免疫性皮肤病及系统性疾病，观察前1个月内无细菌、真菌、病毒感染，既往无银屑病等免疫相关皮肤疾病。 　　1.2 研究对象 　　选取该门诊就医确诊的银屑病患者78例为实验组，男49例，女29例，年龄24～65岁，平均43岁，病程4个月～22年，平均8.5年，PASI[2]评分22～60.6分。另外选取门诊和住院外科手术患者48例（无银屑病等免疫相关性疾病）为对照组，男29例，女19例，年龄25～63岁，平均44岁。 　　1.3 主要试剂 　　兔抗CD4、兔抗IL-17（北京中杉金桥公司），量子点双染荧光试剂盒（武汉珈源量子点技术有限公司），流式抗体藻红蛋白一青色素染料5（PE-cy5）抗人CD3，FITC抗人CD8，藻红蛋白（PE）抗人IL一17A，PE鼠IgG同型对照（美国eBioscience公司），佛波酯肉豆蔻酸乙酸盐（PMA）、莫能星钠盐、伊屋诺霉素钙盐购自美国Sigma公司，FIXPERM（联科生物科技有限公司），IL-17、IL-22ELISA试剂盒（联科生物科技有限公司），多光谱成像仪（Nuance美国剑桥仪器公司），FACSCalibur型流式细胞仪（美国BD公司）。 　　1.4 研究方法 　　1.4.1 组织中Th17细胞的表达 收集实验组患者典型皮损组织和对照组正常皮肤组织。所取组织常规石蜡包埋，切片厚度3 μm，切片脱蜡水化，微波抗原修复，滴加稀释的CD4一抗，37 ℃湿盒孵育2 h。加吐温20的Tris缓冲盐水（TBs-T）洗涤（3×5 min），滴加缓冲液，37 ℃湿盒孵育封闭10 min；滴加稀释的生物素化IgG，37 ℃湿盒孵育30 min；缓冲液封闭20 min；滴加稀释的量子点标记的链酶亲和素复合物（QDs-SA），37 ℃湿盒孵育30 min；TBS-T洗涤（3×5 min），滴加缓冲液。37 ℃湿盒孵育封闭10 min；滴加稀释的IL-17一抗，4 ℃过夜。TBS-T洗涤（3×5 min），滴加缓冲液，37 ℃湿盒孵育封闭20 min；滴加稀释的量子点标记的免疫球蛋白G复合（QDs-IgG），37 ℃湿盒孵育30 min；TBS-T洗涤（3×5 min），Tris缓冲盐水（TBS）洗涤（2×5 min）。缓冲甘油封片，荧光显微镜下紫外光激发观察成像，多光谱分析仪分析结果存盘。QDs-SA波长605 nm，发红光，QDs-IgG波长525 nm，发绿光。红色信号为CD4，绿色信号为IL-17+，黄色区域CD4+IL-17+即为Th