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Exendin-4的固相化学合成及鉴定-PSI、多肽合成、多肽合成仪、客户肽.PDF
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2011,31(2):6973
?
Exendin4的固相化学合成及鉴定
刘延杰 季 虹 林鲁霞 臧学章 宋长征 荣海钦
(山东省内分泌与代谢病研究所 山东省医学科学院 济南 250062)
摘要 Exendin4是首个获准上市的肠促胰素类似物药物,可模拟人体自身激素GLP1的功能,不
仅改善血糖,还能促进胰岛 细胞新生、增殖,抑制 细胞凋亡,改善 细胞功能,促进胰岛素分
β β β
泌,增加机体对胰岛素的敏感性。根据Exendin4的潜在市场价值,以Fmoc固相合成策略为基
础,NMP为反应溶剂,以HOBt/DIC为缩合剂,添加盖帽程序,优化合成工艺条件。肽树脂裂解采
用TFA/Phenol/TIS裂解液,并应用高效液相色谱和四级杆飞行时间串联质谱对其进行分析鉴定
和纯化,最终获得Exendin4,产率为21%,纯度为99.4%。活性测定结果显示,合成的Exendin4
显著提高胰岛瘤细胞的活性,并呈一定剂量依赖性。
关键词 Exendin4 固相化学合成 2型糖尿病
中图分类号 Q819
Exendin4是从分布于美国西南部和墨西哥北部地 下一步临床应用提供基础。
区的钝尾毒蜥唾液中分离得到的多肽,由39个氨基酸
1 材料与方法
组成,与人体内调节血糖浓度的因子胰岛血糖素样肽1
(GLP1)有53%的同源性,二者在体内发挥相同的生 1.1 仪器与试剂
理功能,但 GLP1在体内半衰期短,而Exendin4则不 PSI多肽合成仪(PeptideSynthesizerIns.,美国),
宜被降解,能更好地发挥降血糖和改善胰岛功能的作 Agilent1100高效液相色谱 (Agilent,美国),Agilent
[1]
用 ,因此越来越成为治疗糖尿病的研究热点。 6520四极杆飞行时间串联质谱仪(Agilent,美国),冷
根据Exendin4的潜在市场价值,本实验室对长肽 冻干燥仪(LABCONCO,美国)。氨基酸及 RinkAmide
合成方法进行探索,以多肽固相合成方法为基础,采用 MBHA树脂购自吉尔生化(上海)有限公司,N甲基吡
Fmoc(9芴甲氧羰基)合成策略,以Fmoc基团保护 氨
α 啶烷酮(Nmethyl2pyrolidone,NMP),1羟基苯并三唑
基,叔丁基保护侧链,先将第一个氨基酸的羧基连接到 (1hydroxybenzotriazole,HoBT)、N,N二异丙基碳二亚
不溶性树脂上,随后将 Fmoc基团用六氢吡啶脱去,露
胺(N,N’diisopropylcarbodiimide,DIC),六氢 吡啶
出氨基端,将第二个预先活化的Fmoc保护氨基酸与第
(piperidine,PIP),1乙酰咪唑(1acetylimidazole,AIM),
一个氨基酸进行缩合反应,然后用溶剂N甲基吡啶烷
三氟乙酸(trifluoroacticacid,TFA)、苯酚、三异丙基硅烷
酮洗脱掉未合成的氨基酸,照此方法按多肽序列依次
(triisopropylsilane,TIS),甲基叔丁基醚(methyltertbutyl
将氨基酸连接到树脂上,最后三氟乙酸脱除叔丁基的
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