开 放性实验 血浆凝血酶原时间测定（PT，一期法）（实作、多媒体）.docVIP

开放性实验 血浆凝血酶原时间测定（PT，一期法）（实作、多媒体） 【要求】了解PT测定方法，掌握PT测定的参考值及其临床意义。 【原理】在受检血浆中加入过量的组织因子（兔脑、人脑、胎盘、肺组织等组织的浸出液）和Ca2+启动外源性凝血系统，使因子II转变为凝血酶，后者使因子I转变为纤维蛋白，观察血浆凝固所需要的时间。本试验是外源性凝血系统常用筛选试验。 【试剂】 1．109mmol/L枸橼酸钠溶液。 2．25mmol/L氯化钙凝血活酶制剂（钙凝血活酶）一般为商品试剂，按使用说明书加一定量蒸馏水溶解，混匀后使用。 3．正常人混合冻干血浆，一般为商品试剂，用25个以上正常人血液经109mmol/L枸橼酸钠抗凝（血液：抗凝剂为9：1），以低于3000r/min高心10min后，分离血浆（贫血小板血浆），混合后分装为1ml一瓶，经低温冷冻干燥后保存于冰箱中。 【器材与仪器】秒表、试管、恒温水浴箱、离心机、半自动凝血仪。 【凝血仪法操作】 1．采血 取空腹静脉血1.8ml，加入含有0.2ml 109mmol/L枸橼酸钠的试管中，混匀备用。 2．分离血浆 抗血以3000r/min离心10min，分离血浆（贫血小板血浆）于试管中备用。 3．溶解试剂 按说明书溶解钙凝血活酶和正常混合冻干血浆，置室温15min后使用。 4．预温 将钙凝血活酶试剂、正常人混合血浆、待测血浆于37℃预热5min 5．测定 按仪器操作方法将正常人混合血浆0.1ml与钙凝血活酶试剂0.2ml混匀。仪器自动测定混合物凝固的终点并显示正常人混合血浆的PT秒数。 【试管法操作】 1．2．3．4同凝血仪法的操作。 5．测定 加正常人混全冻干血浆0.1ml于预热试管中，再加入混匀的钙凝血活酶试剂0.2ml混匀并开动秒表计时。8s后，不时从水浴箱中取出试管观察混合液流动状态，当流动停止时终止计时，记录其秒数，即为正常人混合冻干血浆的PT秒数，一般应重复2～３次测定取平均值。 ６．取待检血浆重复４～５步骤，测定待检血浆的ＰＴ秒数，重复2～３次取平均值。 【注意事项】 １．采血应“一针见血”。抗凝剂与血液体积比为１：９，应准确。采血后４h内完成测定。 ２．钙凝血活酶必须标有ISI，ISI越接近于１，试剂越敏感。 ３．标本测定前应先测定正常人混合血浆，其ＰＴ值在允许范围内才能测定样本。 ４．测定方法有仪器法和手工法两类，仪器法由半自动或全自动凝血仪完成，全自动凝血仪的准确性、精密度高。不同仪器及试剂测定同一样本的ＰＴ有并别，但国际标准化比值（INR）理论上应一致。手工法有试管倾斜法和表面皿法，手工法的精密度经仪器法差，但多次重复测定亦能得到较准确的结果。 【参考值】PT=12±ls（超过或短于正常对照值3s为异常） 凝血酶原时间比值（PTR）=被检血浆的PT/正常人血浆的PT=1.0±0.15国际化标准化比值（INR）即PTRISI =1.0±0.1 【临床意义】 1．PT延长 见于先天性凝血因子异常，如因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症；后天性凝血因子异常，如弥漫性血管内凝血、原发性纤溶、维生素K缺乏症、严重肝病；血循环中有抗凝物质，如口服抗凝剂、肝素和FDP等。 2．PT缩短 见于高凝状态和血栓性疾病、先天性因子Ⅴ增多症、口服避孕药等。