实验一 培养基的制备、消毒灭菌及油镜的使用课件.ppt

微生物学实验 微生物实验课注意事项 课程简介：必修课，24学时 考试成绩按以下公式计算： 平时（60％）＋操作考试（40％） 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 不能做与实验无关的事 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 卫生 每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。 实验目的 一 培养基的配制 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 实验原理 (continued) 常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 实验分组安排 5-6人一组，配制牛肉膏蛋白胨固体培养基和马丁氏固体培养基 每组 500ml ?斜面1支（每人），余装三角瓶 牛肉膏蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装（每人一只试管）、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面 操作步骤 称量与溶化： 注意： 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。 操作步骤 (continued) 加琼脂、溶化、定容、（过滤） ? 琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响培养基的pH。 ? 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。 ? 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。 操作步骤 (continued) 分装： 1）装量： 液体——试管高度的1/4左右 固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面 半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂直放置 操作步骤 (continued) 分装： 2）分装装置： 操作步骤 (continued) 3）注意： 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用湿纱布揩净。 棉塞制作方法： 加塞： 棉塞 或 硅胶塞 作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 包扎： ◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。 ◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。 ◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。 操作步骤 (continued) 灭菌时包牛皮纸 灭菌： ◇ 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌 ◇ 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121.3℃灭菌20分钟；含糖量高的培养基，如马丁氏培养基则为0.56kg/cm2,112.6℃灭菌30分钟。 ◇ 操作步骤详见下一课件 操作步骤 (continued) 摆斜面： ◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形成大量冷凝水 无菌检查： 将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小时，以检查灭菌是否彻底。 二 消毒与灭菌 加热法 干热法 湿热法 火焰烧灼 热空气灭菌 压力蒸汽灭菌 间歇灭菌 煮沸灭菌 巴斯德消毒 实验原理 1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。 实验目的 滤膜过滤器的滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为0.45um，过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截流在滤膜上。 过滤除菌—— 许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，应采用过滤除菌。 应用最广的过滤器有蔡氏(Seitz)过滤器和膜过滤器。 紫外线灭菌—— 紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用，其中以265-266 nm杀菌力最强。 无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。 实验原理 (continued) 干热灭菌 电烤箱 实验内容及实验步骤 1、干热灭菌