实验四 细菌芽孢染色法课件.pptxVIP

实验四 细菌芽孢染色法目的要求学习并掌握芽孢染色法，了解芽孢的形状和着生位置等特点基本原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同颜色而便于区别。芽胞壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。器材1.菌种：苏云金芽孢杆菌2.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基3.器具：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、洗瓶、擦镜纸、无菌水；孔雀绿染液、番红水染液、苯酚品红、黑色素溶液等。操作步骤1.将培养24左右的苏云金芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。2.滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。3.用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4-5分钟。也可以不加热，改用饱和的孔雀绿溶液染10分钟。4.倾去染液，待载玻片冷却后水洗至不再褪色为止。5.用番红水溶液复染1分钟，水洗。6.待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。实验五 酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用的时间等均有影响，应加注意。器材1.菌种：啤酒酵母，假丝酵母菌；2.培养基：酵母膏培养基；3.器具：显微镜，酒精灯，载玻片，盖玻片，接种环，洗瓶，擦镜纸，无菌水；0.1%吕氏碱性美蓝染液，碘液。操作步骤1.美蓝浸片观察 ·在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取在斜面上培养48小时的酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 ·用镊子夹盖玻片一块，小心的盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 ·将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 ·染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 ·用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。2.水-碘浸片观察 在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘液，然后再在其上滴加三滴水，取酵母菌少许，放在水-碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。