现代临床胰岛移植课件.ppt

移植配型 ABO血型 淋巴细胞毒抗体交叉试验 受体PRA（panel reactive antibody) 供体AHG（aggregated human globulin）交叉配型 不需HLA配型 胰岛分离与评估 胰腺获取 消化酶 消化 收集 纯化 灌注 培养 制成输注悬液 评估 评估 评估 GMPGood manufacture practice 消化酶灌注 消化酶配方：HBSS，Liberase… 灌注量相当于胰腺质量的两倍，体积200－350mL 灌注压力控制 消化时间约30－60min 修剪供体 胰管插管 消化酶灌注 膨胀的胰腺 纯化前 纯化后 活力评估 荧光染色（FDA PI） 细胞免疫组化insulin染色 静态胰岛素分泌，SI 动态胰岛素分泌，即三阶梯葡萄糖刺激试验，SI，AUC 动态胰岛素分泌 纯化胰岛样品CMRL1066培养过夜，三阶梯葡萄糖刺激实验，检测胰岛素分泌，评估参数包括SI和AUC。 成功分离与不成功分离有不同的胰岛素分泌图形。 分离成功的标准 每个胰腺在纯化程序后回收胰岛 300，000IE；纯度50％；活力评估＞70％；SI＞3 现在成功分离可达40万－60万IE/胰腺 最高记录超过90万IE/胰腺，纯度95% 移植前培养 CMRL1066＋同型人白蛋白＋…… 悬浮培养（95％空气，5％CO2） 37℃过夜，22℃24－48小时 输注前评估 荧光染色活力＞70％ 胰岛计数＞300，000IE 细胞容积＜10mL Gram染色未见细菌污染，内毒素检测阴性 输注悬液 纯化培养后的胰岛洗涤后悬于： M199 ＋ 35U/kg体重＋20％同型人 培养基 肝素 血清蛋白 容积120mL 现代临床胰岛移植 胰腺移植 胰岛移植（1970－1990年代） 胰岛移植的历史 胰岛移植 1型糖尿病 微创的移植方式 最接近自然生理的调节，保持血糖稳定，避免反复发作的低血糖 遏制血管神经并发症 保护肾脏 更低的抗原性 治愈性方法，脱离胰岛素依赖，恢复生活质量 成功标准 世界首例人同种异体胰岛移植： 1974年美国明尼苏达大学 以失败告终 失败原因： *胰岛分离技术的限制 *免疫抑制治疗的限制 截至1999年8月,国际胰岛移植备忘录（ITR）统计405例同种异体胰岛移植成功率 移植时间 1M 3M 6M 12M 24M 36M 48M 治疗成功 50 47 41 33 20 9 3 者(n) 百分比（％） 12.3 11.6 10.1 8.1 4.9 2.2 0.7 胰岛移植的供受比例为：4－6：1 1986年Ricordi胰岛分离法 供体胰腺 Collagen消化+轻柔机械振荡 平衡液持续冲洗收集+密度梯度离心纯化 高质量的胰岛 1999, Edmonton protocolUniversity of Alberta, Edmonton, Canada ● New Engl J Med 2000,343:230-238 Edmonton方案的主要改进 ●胰岛分离纯化方法的改进 IE per isolation 435,318±216,164 IE IE per gram of tissues 4,661 ±1,875 IE/g Viability 92.14 ±3.38 % purity 80-95 % ●无糖皮质激素的免疫抑制处方 达珠单抗，西罗莫司，低剂量他克莫司 （IE，标准直径150μm胰岛当量） Edmonton protocol的成功率 Edmonton中心总成功率一年80％，三年50％，最长非胰岛素依赖已超过