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* 药品微生物的检测内容 局限性 无菌：不含任何活得微生物 无菌保证水平 （sterility assurance level, SAL） 无菌检验 灭菌工艺 GMP管理 质量保证体系 * 1、微生物限度检查的概念与意义 微生物限度检查是指非规定灭菌制剂及其原料、敷料受到微生物污染程度的一种检查法。允许一定限量的微生物存在，但不得存在可疑致病微生物。 微生物限度检查是药品卫生质量的一个重要依据；也是药品生产企业管理和质量体系评审的一个重要手段，反映药品生产工艺的科学性、合理性和质量管理水平。 （二）微生物限度检查 * 2、微生物限度检查的方法 包括细菌总数、霉菌及酵母菌和控制菌的检测 细菌菌落总数、霉菌和酵母菌菌落总数测定：这是检测药品质量的一个重要指标，也是对药品原料、生产工艺、生产环境以及操作人员卫生状况进行卫生学综合评价的依据之一。 * 控制菌的检查：非规定灭菌药品中不得检出的菌类成为控制菌。药品中不允许污染致病微生物，每种药品通过分析某种致病微生物存在的可能性，从而确定其控制菌。 我国规定的药品控制菌包括大肠埃希菌、沙门菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和破伤风梭菌等。在检验同时需用标准菌株作对照试验。 * 3、微生物限度检查的结果判定 如果供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数以及控制菌三项检测结果符合该品种规定，则判定为合格；若其中任何一项不符合规定，则判定为不合格。 控制菌或其他致病菌的检测，按一次检出结果为准，不再复试；细菌数、霉菌和酵母菌数，其中任何一项不符合规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。 * 药品微生物的检测内容 结果判定 细菌总数 控制菌 霉菌、酵母菌总数 符合品种规定 符合规定 任一项不符合品种规定 不符合规定 * 药品微生物的检测内容 细菌总数 控制菌 霉菌、酵母菌总数 不符合规定 不复试 任一项不符合品种规定 独立复试2次 报告平均值 结果判定 * 1、细菌内毒素和热原质检查的概念与意义 细菌内毒素，是G(-)菌细胞壁脂多糖中的类脂A，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。 内毒素耐热，加热100℃ 1h不被灭活，必须160℃ 2-4h或用强酸、强碱、强氧化剂煮沸30min才被灭活。 （三）细菌内毒素和热原质的检查 * 热原质：能引起机体发热的物质，可分为内源性和外源性热原质。外源性包括G(-)菌内毒素和少数G(+)菌外毒素。内源性热原质来源于机体自身，如淋巴细胞释放的IL-1、INF-α和IFN-β等内源性热原质。 热原质可通过一般细菌滤器，但没有挥发性，所以，除去热原质最好的方法是蒸馏。 * 2、细菌内毒素和热原质检查的方法 细菌内毒素检查法：1956年美国人发现鲎血液遇G(-)菌内毒素时会产生凝胶，从而创立了鲎试剂检测法。由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，目前已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。 “细菌内毒素试验”被称作鲎试验，收载于1980年20版美国药典。随后英、德、意、日以及中国相继在药典中收载了这一检查法。细菌内毒素检查法包括凝胶法和光度测定法两种。前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质（比色）法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。 * 内毒素检查法 药品微生物的检测内容 内毒素： G－菌细胞壁的组分，是在细菌死亡破裂后释放出的脂多糖成分。 检查法：鲎实验 鲎是一种海洋节肢动物，其血液中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆中含有凝固酶原和凝固蛋白原。 * 原 理 内毒素（LPS） 　激 活 凝固蛋白原 凝固蛋白 （溶解状态） （凝胶状态） 凝固酶原 凝固酶 灵敏度：0.0001μg内毒素 * * 热原质检查法：又称家兔热原试验，是将一定剂量的供试品静脉注射入家兔体内，在规定时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原质的限度是否符合规定。 内毒素活性与药品中热原质的存在具有很高的相关性，在注射剂GMP生产环境下，不存在内毒素也就意味着不存在热原质。因此，鲎试验逐渐替代家兔热原试验，但由于部分药品自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，因此鲎试验还无法完全取代家兔热原试验。 * 热原质检查法 药品微生物的检测内容 热原质：能引起机体发热的物质。 外源性：细菌合成代谢所产生，主要包括G－内毒素和少数G＋分泌的外毒素。 内源性：机体自身产生，IL-1。 检查法：家兔热原实验方法 * 三、药品微生物学标准 正确