中低压制备色谱课件.pptVIP

中低压制备色谱;俄国科学家 M. S. Tswett;薄层色谱（TLC）是化学工作者检测、鉴定混合物组分的一种简单、快捷而低廉的方法，是基于混合物中各组分与流动相和固定相作用力存在差异使得它们保留时间不同而完成分离。;薄层色谱的核心是展开剂的选择问题，选择展开剂之前，要对各组分所有的物质有详细的了解，包括： ● 所含化合物的数目； ● 化学结构和分子量； ● PKa值和UV谱图； ● 在样品中的浓度范围和溶解度。;;DCM;1：多种溶剂对待分物进行爬板研究，发现在乙醇中各组分爬的高而分不开，在丁酮中各组分爬的低而分不开，只有二氯甲烷极性适中，但是只能分开最下面的点，上面的部分不能有效分开。 2：通过增加其它溶剂降低乙醇或增强丁酮的极性，选择合适的溶剂体系，使极性与二氯甲烷极性相同。7:3的乙醇/正己烷体系，最上面的点和其余组分能够有效分开，但其余各组分相互之间不能分开。9:1的丁酮/水体系，极性合适，但各组分仍不能分开。 3：鉴于第一步和第二步的分离情况，二氯甲烷体系中最下面点分离最好，7:3的乙醇/正己烷体系上面点分离最好，就采用它们作为溶剂体系进行分离研究，，研究后发现，这两种体系在5:5的比例混合后效果最好。 最终确定采用乙醇、正己烷、二氯甲烷三元体系可以将待测样品完全分开。;溶剂;常用（TLC）的展开方法;硅胶色谱中常用的TLC展开剂;柱色谱层析;柱填料对选择性的影响;柱填料对选择性的影响;柱填料对选择性的影响;装柱;上样;柱色谱上样量计算;推荐上样量;流动相选择;柱色谱压力模式;柱色谱建立; ΔCV = CVa - CVb = 1/Rfa - 1/Rfb 一般来说，只有ΔCV大于1时，二者在柱色谱中才可以完全分离。实际操作时，当溶剂流过一个柱体积时，样品在色谱柱内移动的相对值往往大于Rf，因此ΔCV往往小于计算值，这要求我们在设计色谱条件时更应加大ΔCV的计算值。在理想的快速色谱分离中，待分离的化合物应该在3-6个柱体积内洗脱下来，并且，两个相互分开的物质，洗脱的柱体积应该在1以上。 由于不同生产厂商的生产的硅胶的相对的湿度、颗粒度大小和结合剂的不同，有时候的最佳TLC分离条件并不??直接应用到快速色谱分离。在实际工作中，应该考虑这些因素的影响，建议使用同一生产厂家的统一规格的固定相，流动相的租成比例应以体积比为准，和快速色谱系统的表示方式一致。 ;Rf和ΔCV关系表;洗脱方式;2;影响分离度的因素：K’、α及N;初始;N ＝ 理论塔板数：分离效率的量度;峰宽与塔板数的关系;K? ＝ 容量因子：保留能力的量度;? ＝ 分离因子：峰分离程度的量度;1 根正相柱;1.2 min;上海利穗 ;全自动快速柱层析系统;全自动快速柱层析系统;快速层析系统优点:;快速制备层析系统适用于:化学合成/天然产物/生物组分的分离提纯;自动在线检测，灵活配置;标准品的分离;Method 设定界面;标准样测试谱图 ;皂苷类化合物制备图 仪器：EZ Purifier 中压制备系统； 色谱柱：3根12g制备柱串联，填料为ODS-AQ（30-50μm） ； 流动相：A— 0.1％甲酸水溶液，B— 乙腈，梯度洗脱。 监测波长：214nm； 收集波长：254nm； 流速：25ml/min。;