毕业论文设计《飞扬草总黄酮量提取工艺及抗氧化性研究》.docVIP

飞扬草总黄酮量提取工艺 及抗氧化性研究 [摘 要] 采用乙醇浸提法研究飞扬草总黄酮类物质的提取工艺及其抗氧化性能。探讨了单因素对总黄酮含量提取的影响，并采用了正交实验优化总黄酮提取最佳的工艺条件。结果表明， 最佳提取参数为：提取温度为70℃，时间为3h，料液比1:20(g:ml),乙醇浓度为60%。 在此条件下测得总黄酮含量为56.650mg/g，提取物对羟自由基具有较好的清除效果。 [关键词]飞扬草；总黄酮；提取工艺；自由基的清除率 前言 飞扬草为一年生草本，高20-50厘米，全体有乳汁；茎基部膝曲状向上斜升，近基部分枝，枝被粗毛，在上部的毛更密。叶为单叶，对生，披针状长圆形或长圆状卵形，长1-3厘米，宽0.5-1.3厘米，顶端急尖或钝，基部偏斜，不对称，边缘有细锯齿，稀全缘，两面被柔毛，背面及沿脉上的毛较密，叶柄长 1-2毫米，托叶膜质，披针形或线状披针形，边缘刚毛状撕裂，早落。夏季及秋季开淡绿色或紫色小花；杯状聚伞花序再排成紧密的腋生头状花序；总苞钟状，外面密生短柔毛，顶端4-5裂；腺体4枚，漏斗状，有短柄及花瓣状附属物。雄花多数，每一雄花仅具1雄蕊，雌花单生于总苞的中央，仅有一个3室的子房和花柱3枚。蒴果卵状三棱形，长1.5毫米，被贴伏的柔毛；种子卵状四棱形，每面有多少明显的横沟。治疗急性肠炎及菌痢治疗慢性气管炎生于向阳山坡、山谷、路旁和灌木丛下，多见于砂质土上或村边。分布于我省及广西、云南、湖南、江西、福建、台湾等省区。日本、菲律宾、印度尼西亚、印度等热带与亚热带地区亦有分布。 飞扬草採摘到实验室去杂后，用日晒进行杀青，并用60℃的温度对其进行烘干，然后进行粉碎，过40目筛，保存于广口瓶中待用。 2.3 提取工艺过程 飞扬草→洗净杀青烘干→粉碎→过40目→乙醇加热浸取→冷却后抽滤→飞扬草黄酮提取物 2.4 总黄酮含量的测定 2.4.1 波长的选择 取样品液适量，在0.30mL 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420一700nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2.4.2总黄酮测定方法 由于黄酮类物质能与铝离子生成紫红色络合物，以蒸馏水为空白组，采用可见分光光度计测定其含量。 准确称取飞扬草1.00g，按照实验条件进行浸提，再对浸提后的样品进行冷却抽滤，得到滤液，将滤液与乙醇溶液进行定容于50mL的容量瓶中，再从中准确量取1mL的提取液于10mL的容量瓶，向其加入0.3mL 5％的NaNO2溶液，静置3min，再从中加入0.3mL 10％的Al（NO3）3溶液静置3min，最后加入4mlNaOH溶液静置6min，在510nm处测其吸光度A。 2.4. 3 标准工作曲线的制作 用移液管分别准确吸取0.10 mg/mL的芦丁对照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于10.00 mL容量瓶中，分别加入0.3 mL 5％亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min；再加入0.3 mL 10％硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min；再加入4.00 mL 4％氢氧化钠溶液，用乙醇溶液定容至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510nm处测吸光度。吸光度测定结果下表。 表1 芦丁标准样的吸光度 Table 1 The absorbance of rutin standard sample 浓度（mg/mL） 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 吸光度/A 0.000 0.084 0.171 0.250 0..325 0.401 图 1 标准曲线 Figure 1 Standard curve 2.5 提取液总黄酮浓度的计算： 根据实验方法，将实验测得的吸光度A数值代入回归方程A=0.00377+8.04266X，r=0.9996。中，求出其X值，所得即为显色后总黄酮的浓度C1（mg/mL）。定容后浸提液中总黄酮,其单位mg，这个即为1.00g含有的总黄酮量M（mg）。 2.6 影响提取工艺效果的因素试验 2.6.1单因素试验设计方案： 由于各因素之间的相互影响，主要对浸提温度、乙醇浓度、时间和料液比进行研究。 2．6.2正交试验设计方案： 以单因素试验较优结果为依据，设计乙醇浓度、提取时间、料液比、浸提温度四因素三水平的正交试验，以获取最佳提取工艺相应参数。 3．结果与分析 3.1 乙醇浓度对提取率的影响 分别用不同浓度的乙醇 (40％,50％,60％,70％,80％)，在提取温度为60℃，料液比为1:10，提取时间120min的条件下，乙